蜂王肠道酶及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106480002A(43)申请公布日2017.03.08(21)申请号201611055073.6(22)申请日2016.11.25(71)申请人威海恒基伟业信息科技发展有限公司地址264200山东省威海市高区火炬路213-2号创新创业基地A座1411室(72)发明人张恒(51)Int.Cl.C12N9/64(2006.01)C12P21/06(2006.01)权利要求书1页说明书12页附图13页(54)发明名称蜂王肠道酶及其制备方法和用途(57)摘要本发明涉及生物医药技术领域,具体涉及一种蜂王肠道酶及其制备方法和用途。本方法通过从蜂王幼虫体内提取肠道酶,模拟蜂王体内酶解环境对蜂王浆进行酶解得到1～3kDa、3～5kDa的蜂王浆多肽,制得的蜂王浆多肽能够用于制备Aβ抑制剂。CN106480002ACN106480002A权利要求书1/1页1.一种蜂王肠道酶的制备方法，其特征在于，包括：将2～3日龄的蜂王幼虫肠道，加入pH值为7.0～7.2的磷酸盐缓冲溶液或Tris-HCl缓冲溶液研磨成匀浆，在18000～25000g，4℃条件下离心20～30min，收集第一次离心后的中层液体，然后在18000～25000g，4℃条件下离心20～30min，收集第二次离心后的中层液体，得到蜂王肠道酶。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲溶液的浓度为50mmol/L。3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蜂王幼虫的肠道与磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲溶液的质量体积比以g/mL计为1∶1～1∶2。4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，离心的条件为在20000g，4℃条件下离心20min。5.如权利要求1至4任一项所述的制备方法制得的蜂王肠道酶。6.如权利要求5所述的蜂王肠道酶在对蜂王浆进行酶解得到蜂王浆多肽的应用。7.如权利要求5所述的蜂王肠道酶在对蜂王浆进行酶解得到1～3kDa的蜂王浆多肽的应用。8.如权利要求5所述的蜂王肠道酶在对蜂王浆进行酶解得到3～5kDa的蜂王浆多肽的应用。2CN106480002A说明书1/12页蜂王肠道酶及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及蜂王肠道酶及其制备方法和用途。背景技术[0002]近年来，随着人类平均寿命的增加，老年人口的比例不断上升，我国人口老龄化日趋明显，阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)作为老年期痴呆最常见的类型，已经引起全社会的广泛关注。阿尔茨海默病是一种以记忆力下降和认知功能障碍为特征的复杂的多因素慢性进行性精神衰退疾病，临床表现为进行性记忆和认知能力减退、语言障碍、精神运动异常等症状。患者早期以近记忆下降为主，疾病后期远记忆也受累及，日常生活受到影响，表现为学习新知识困难，工作主动性下降，承担新任务无法胜任，并随时间推移而加重，伴有语言障碍、计算障碍，视空间障碍，丧失日常技能，失去认知能力等。阿尔茨海默病发病隐匿，进行性加重，会给患者及其家人带来巨大的痛苦，严重阻碍着社会经济的健康稳定发展。如今，阿尔茨海默病已成为继心脏病、肿瘤和中风之后的第四大杀手，国际国内针对阿尔茨海默病的治疗还没有特效药物，且其综合治疗疗程长、显效慢。[0003]国际国内学者对阿尔茨海默病的研究结果表明，阿尔茨海默病发病机制非常复杂，其确切病机目前尚不清楚，同大多数其他长期性疾病一样，阿尔茨海默病是由多因素导致的，由此形成了多种假说。但众多的研究证明，Aβ级联假说是目前阿尔茨海默病发病机理的主流学说，该假说指出Aβ的过度积累是AD发病的基础，而Aβ产生与清除的失衡是导致其过度累积的原因。[0004]蜂王浆(RoyalJelly，RJ)又名蜂皇浆，俗称蜂王乳，是6-18日龄青年工蜂的下咽头腺和上颚腺等腺体所分泌的特殊物质。蜂王浆呈乳白色或淡黄色，半透明，微黏稠，有特殊香味，味酸、涩、辛、微甜，主要为蜂王的终身食物及工蜂幼虫孵化后的前三天食物，具有免疫调节、抗菌、抗炎、抗肿瘤、调节血压、降低血糖和促进细胞生长等功能。[0005]研究发现，蜂王浆对包括阿尔茨海默病在内的神经性疾病有良好的改善作用，蜂王浆中的某些物质具有提高神经系统的传递功能、增强对大脑的营养功能、增加特定神经营养因子的表达量、促进大脑细胞的神经生长、促进大脑中神经干细胞向神经元、星状细胞和胶质细胞的分化，改善小鼠的认知功能障碍，提高大鼠的学习记忆指数等作用。因此，蜂王浆能够成为改善阿尔茨海默病等神经性障碍疾病的发生和发展的潜在药物来源。[0006]我国是世界上最大的蜂王浆生产国，产量占世界的90％以上，但其多以原料性的产品出口，缺乏深加工产品，从而导致产品价格较低，