一种鉴别枣花蜜、荆条蜜、洋槐蜜和龙眼蜜的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107515256A(43)申请公布日2017.12.26(21)申请号201710315049.X(22)申请日2017.05.08(71)申请人西北大学地址710069陕西省西安市太白北路229号申请人陕西蜂产品工程技术研究中心(72)发明人曹炜程妮孙政杨万锁(74)专利代理机构西安西达专利代理有限责任公司61202代理人谢钢(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种鉴别枣花蜜、荆条蜜、洋槐蜜和龙眼蜜的方法(57)摘要本发明公开了一种鉴别枣花蜜、洋槐蜜、荆条蜜和龙眼蜜四种蜂蜜的方法。首先测定了不同产地的四种的总蛋白质含量，超滤法提取蜂蜜中的蛋白质，酸法水解后，高效液相色谱法测定蛋白质水解氨基酸含量，判别分析法处理蛋白质水解氨基酸数据，建立判别模型。本发明设计合理，所选分析仪器灵敏度高，可行性强，可准确鉴别枣花蜜、洋槐蜜、荆条蜜和龙眼蜜四种蜂蜜，为这四种蜂蜜的花源鉴别提供可靠依据。CN107515256ACN107515256A权利要求书1/1页1.一种基于蛋白质水解氨基酸鉴别四种蜂蜜花源的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）采集不同产地的荆条蜜、洋槐蜜、枣花蜜和龙眼蜜样品各10个作为研究对象，将蜂蜜样品加蒸馏水溶解、定容，采用考马斯亮蓝法测定蜂蜜样品的总蛋白质含量；（2）采用超滤法分别提取四种蜂蜜中的蛋白质，-20℃冷冻干燥，收集蛋白粉末，酸法水解蛋白质，使用watersAccq·Tag试剂盒衍生蛋白质水解氨基酸，配制成供试样品；（3）使用HPLC-DAD测定样品中蛋白质水解氨基酸含量；（4）以18种蛋白质水解氨基酸含量为变量，运用化学计量学中Fisher判别分析方法对蜂蜜样品进行分析，四种蜂蜜能够按花源准确分类。2.根据权利要求1所述的基于蛋白质水解氨基酸鉴别四种蜂蜜花源的方法，其特征在于：步骤（3）中，液相色谱条件为：色谱柱：watersAccq·Tag氨基酸分析柱；流动相：乙腈，超纯水和watersAccq·Tag缓冲液；流动相流速：1.0mL/min；洗脱方式：梯度洗脱；检测波长：248nm；柱温：37℃。3.根据权利要求1所述的基于蛋白质水解氨基酸鉴别四种蜂蜜花源的方法，其特征在于：步骤（4）中，所述18种蛋白质水解氨基酸为：天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸。2CN107515256A说明书1/5页一种鉴别枣花蜜、荆条蜜、洋槐蜜和龙眼蜜的方法技术领域[0001]本发明涉及一种鉴别枣花蜜、荆条蜜、洋槐蜜和龙眼蜜的方法，特别是基于蛋白质水解氨基酸含量鉴别四种蜂蜜花源的方法，属于食品科学领域。背景技术[0002]蜂蜜（honey）是一种富含多种营养物质的天然甜味剂，花源植物是影响蜂蜜营养价值和市场价格的最主要因素。枣花蜜、荆条蜜、洋槐蜜和龙眼蜜是我国产量较大，品质较好的四种蜂蜜。枣花蜜（ZiziphusjujubaMlii）呈琥珀色、深色，蜜汁透明或略浊，有光泽，质地粘稠，气味浊香，有特殊的枣花香味。荆条蜜（vitexnegundoL）呈半透明琥珀状，结晶细腻乳白，口感甜而不腻。洋槐蜜（RobininpseudoacaciaL.）呈水白色，透名状，具有槐花香味，不易结晶，为上等蜂蜜。龙眼蜜（DimocarpuslonganLour.）呈琥珀色，食味甘甜，不易结晶，具有龙眼的浓烈香气，是蜜中上品。[0003]蛋白质是蜂蜜中一类重要的营养物质。目前对蜂蜜中蛋白质的研究多集中于蛋白质电泳、酶活性和蛋白质免疫特性三个方面，但是蛋白质电泳很难提供精确的数据，而酶活性和蛋白质免疫特性的研究又需要精密仪器。基于不同蜂蜜中蛋白质种类和含量的不同，研究蛋白质水解氨基酸含量间的差异，是研究蜂蜜蛋白质的一个新方向。发明内容[0004]本发明目的是提供一种基于蛋白质水解氨基酸鉴别四种蜂蜜花源的方法。[0005]本发明实现过程如下：一种基于蛋白质水解氨基酸鉴别四种蜂蜜花源的方法，主要通过超滤法提取蜂蜜中的蛋白质，将蛋白质酸式水解后，利用高效液相色谱串联二极管阵列检测器测定蛋白质水解氨基酸含量，结合化学计量学方法对进行花源鉴别的方法。[0006]具体来说包括以下步骤：（1）采集不同产地的荆条蜜、洋槐蜜、枣花蜜和龙眼蜜样品各10个作为研究对象，将蜂蜜样品加蒸馏水溶解、定容，采用考马斯亮蓝法测定蜂蜜样品的总蛋白质含量；（2）采用超滤法分别提取四种蜂蜜中的蛋白质，-20℃冷冻干燥，收集蛋白粉末，酸法水解蛋白质，使用watersAccq·Tag试剂盒衍生蛋白