洋槐蜜中掺有油菜蜜的鉴别方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103592395103592395A(43)申请公布日2014.02.19(21)申请号201310647702.4(22)申请日2013.12.06(71)申请人西北大学地址710069陕西省西安市太白北路229号申请人陕西蜂产品工程技术研究中心(72)发明人曹炜王锦梅赵静程妮雷兴生(74)专利代理机构西安西达专利代理有限责任公司61202代理人谢钢(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书5页说明书5页附图5页附图5页(54)发明名称洋槐蜜中掺有油菜蜜的鉴别方法(57)摘要本发明公开了一种鉴别洋槐蜜中掺入油菜蜜的方法，首先用树脂从蜂蜜中提取出酚酸类化合物，并用色谱纯甲醇定容制成供试品溶液；再分别取一定量的十种酚酸对照品，用色谱纯甲醇定容配制成对照品溶液。测定方法是分别吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪，以对照品为参照物，测定并记录色谱图，得到洋槐蜜的HPLC-ECD指纹图谱，再用同样的方法得到油菜蜜和掺入油菜蜜的洋槐蜜的HPLC-ECD指纹图谱，将三者进行比较并结合化学计量学的方法来鉴别洋槐蜜中是否掺入油菜蜜。本发明设计合理，分离效果好、灵敏度高、可行性强，解决了洋槐蜜掺假鉴别及质量控制中的一个重要的技术问题。CN103592395ACN103592ACN103592395A权利要求书1/1页1.一种洋槐蜜中掺有油菜蜜的鉴别方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取重量份1−3份没食子酸、1−3份原儿茶酸、8−10份对−羟基苯甲酸、1−3份绿原酸、1−3份咖啡酸、1−3份丁香酸、1−3份p−香豆酸、1−3份阿魏酸、1−3份鞣花酸和1−3份迷迭香酸十种酚酸标准品用色谱纯甲醇溶解并定容，配制成对照品溶液；（2）将纯洋槐蜜、纯油菜蜜及掺有质量百分含量5%～50%油菜蜜的洋槐蜜样品加蒸馏水溶解，调节pH为2～3得到蜂蜜水溶液，蜂蜜水溶液通过装填有XAD−2、LS−46D、DM−130、LS−08或AB−8树脂的层析柱，分别用pH为2～3的盐酸水溶液和蒸馏水冲洗柱子，再用甲醇洗脱，蒸干洗脱液得到的残留物用色谱纯甲醇溶解并定容，配制成供试品溶液；（3）分别吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪中，得到对照品色谱图和纯洋槐蜜，纯油菜蜜以及掺有油菜蜜的洋槐蜜的HPLC−ECD（高效液相色谱串联电化学检测器）指纹图谱；（4）吸取加有对照品溶液的供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪中，测定并记录色谱图，分别得到加有对照品溶液的纯洋槐蜜和纯油菜蜜的HPLC−ECD图谱；（5）将纯洋槐蜜的HPLC−ECD指纹图谱和纯油菜蜜的HPLC−ECD指纹图谱对比，保留时间21.15min为绿原酸的共有峰，保留时间56.26min为鞣花酸的共有峰，这两个峰作为鉴别洋槐蜜和油菜蜜的特征峰；（6）以十种酚酸的含量为参数，运用化学计量学中主成分分析的方法对蜂蜜样品进行分析，样品被分为三类，第一类是纯洋槐蜜，第二类是纯油菜蜜，第三类是掺有5%以上油菜蜜的洋槐蜜；（7）将通过主成分分析得到的两个主成分X1和X2作为Fisher判别分析的两个判别指标，带入判别函数F1、F2和F3中，求得Fisher判别函数大小，数值最大的即为相应类别，F1=-1.564X1+42.471X2-17.434F2=-67.055X1-53.279X2-67.556F3=-12.255X1+24.581X2-11.561其中，X1为主成分1;X2主成分2；F1为纯洋槐蜜的判别函数，F2为纯油菜蜜的判别函数；F3为掺有5%以上油菜蜜的洋槐蜜的判别函数。2.根据权利要求1所述洋槐蜜中掺有油菜蜜的鉴别方法，其特征在于色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为甲醇和0.1%醋酸水溶液；采用梯度洗脱方式；流速1.0ml/min；检测电压：0.8−1.0V；检测波长：260nm或280nm或290nm或320nm；柱温：30℃。3.根据权利要求1所述洋槐蜜中掺有油菜蜜的鉴别方法，其特征在于：步骤（2）中，称取纯洋槐蜜、纯油菜蜜及掺有质量百分比为5%、10%、20%、30%、40%、50%油菜蜜的洋槐蜜样品，加入5倍重量的蒸馏水溶解，并用HCl调节pH值为2得到蜂蜜水溶液。4.根据权利要求3所述洋槐蜜中掺有油菜蜜的鉴别方法，其特征在于：步骤（2）中，蜂蜜水溶液通过装填有AmbethteXAD−2树脂的层析柱。2CN103592395A说明书1/5页洋槐蜜中掺有油菜蜜的鉴别方法技术领域[0001]本发明涉及一种洋槐蜜中掺有油菜蜜的鉴别方法，特别是利用高效液相色谱指纹图谱结合化学计量学法鉴别洋槐蜜中掺有油菜蜜的方法，属于食品科学领域。