一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的培养基及培养方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108165590A(43)申请公布日2018.06.15(21)申请号201711380541.1(22)申请日2017.12.20(71)申请人河南科技学院地址453000河南省新乡市红旗区五一路东段申请人中国农业科学院蜜蜂研究所集美大学(72)发明人王昊鹏吴黎明倪辉肖安风赵柳微杜开书张中印(74)专利代理机构厦门创象知识产权代理有限公司35232代理人赖庆梧(51)Int.Cl.C12P17/16(2006.01)C12R1/68(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的培养基及培养方法(57)摘要本发明公开了一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的种子培养基及其发酵培养基，同时公开了一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的方法，包括以下步骤：步骤一、将所述的烟曲霉接种于所述种子培养基进行菌种的活化，培养基pH值自然；步骤二、将活化的菌种制备单孢子菌悬液接种于所述发酵培养基，所述发酵培养基pH值自然，进行发酵培养，收集发酵液中的烟曲霉素。本发明针对影响烟曲霉素的碳源进行了筛选，意外发现使用甘油作为碳源可以避免胶霉毒素等副产物的产生，无需后续进行分离纯化，降低了生产成本，便于工厂大规模化生产。CN108165590ACN108165590A权利要求书1/1页1.一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的种子培养基，其特征在于：每升所述种子培养基中包括以下质量体积比的组分：甘油22.0~50.0g/L，MgSO4·7H2O0.1~0.5g/L，NaCl10.0~20.0g/L，KH2PO40.1~0.5g/L，FeSO4·7H2O0.013g/L，CuSO4·5H2O0.004g/L，CaCO31~5g/L，蛋白胨10~30g/L，琼脂15~20g/L，余量为水。2.一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的发酵培养基，其特征在于：每升所述种子培养基中包括以下质量体积比的组分：甘油20~50g/L，酵母提取粉1~10g/L，MgSO4·7H2O1~10g/L，KCl1~10g/L，K2HPO45~30g/L，FeSO4·7H2O0.013g/L，玉米粉1~20g/L，余量为水。3.一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、将所述的烟曲霉接种于所述种子培养基进行菌种的活化，培养基pH值自然；步骤二、将活化的菌种制备单孢子菌悬液接种于所述发酵培养基，所述发酵培养基pH值自然，进行发酵培养，收集发酵液中的烟曲霉素。4.如权利要求3所述的一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的方法，其特征在于：所述步骤一中，菌种的活化条件为：温度25~35℃，培养周期6~10天。5.如权利要求3所述的一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的方法，其特征在于：所述步骤二中，采用摇瓶发酵的方式进行发酵，所述摇瓶发酵条件为：培养温度25~40℃，摇床转速80~200rpm，玻璃珠0~20颗，接种量体积百分比0.5%~5%，玉米粉质量体积比1~20g/L，装液量50mL/250mL。6.如权利要求5所述的一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的方法，其特征在于：所述摇瓶发酵的发酵培养温度为30℃，摇床转速180rpm；所述玻璃珠为直径6mm，添加量为10颗；接种量体积百分比1%；整个发酵培养过程做遮光处理。7.如权利要求3所述的一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的方法，其特征在于：所述步骤二中，采用5L发酵罐的方式进行发酵，所述5L罐发酵条件为：温度25~35℃，转速600~1000rpm，氧气通量1~3L/min，接种量体积百分比1.0~5.0%、玉米粉质量体积比1~20g/L，pH值6~7。8.如权利要求7所述的一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的方法，其特征在于：所述5L发酵罐的发酵培养温度为25~30℃，转速700~800rpm；发酵罐通气量为1~3L/min；发酵罐接种量为2~4%。2CN108165590A说明书1/5页一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的培养基及培养方法技术领域[0001]本发明涉及微生物发酵工程的技术领域，尤其涉及一种烟曲霉发酵产烟曲霉素的培养基及培养方法。背景技术[0002]烟曲霉素是烟曲霉(Aspergillusfumigatus)发酵产生的一种重要的次级代谢产物。蜜蜂微孢子虫病是全球性疾病，它是由蜜蜂孢子虫寄生在蜜蜂肠上皮细胞所引起的寄生病，受到微孢子虫侵染的蜜蜂抵抗力变弱，常常引起蜜蜂感染多种病害如，马氏管变形虫病、慢性麻痹病、螺旋体病和白垩病等，一旦发生给养蜂人带来不可估量的经济损失。烟曲霉素是美国和加拿大等国家唯一承认并用于蜜蜂微孢子虫病防治的药物，使用烟曲霉素防治蜜蜂微孢子虫病，它虽不杀死蜜蜂微孢子虫，但能有效遏制微孢子虫的繁殖蔓延，从而整体上降低了蜂群的感染率，增加蜜蜂及幼虫的数量，减少蜂