一种烟曲霉素的提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105622593A(43)申请公布日2016.06.01(21)申请号201610104785.6(22)申请日2016.02.25(71)申请人中国农业科学院蜜蜂研究所地址100093北京市海淀区香山北沟1号(72)发明人薛晓锋吴黎明倪辉曹葳蕤杜冰赵柳微王妙张中印(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人郝瑞刚(51)Int.Cl.C07D407/04(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种烟曲霉素的提取方法(57)摘要本发明提供一种烟曲霉素的提取方法，包括步骤：1)将烟曲霉素发酵液的pH值调节为1～6.0，用大孔树脂吸附；2)吸附后的树脂置于层析柱中，用质量浓度15～30％的乙醇水溶液清洗；3)用无水乙醇或质量浓度50～98％的乙醇水溶液洗脱树脂，洗脱液经浓缩和干燥，得到烟曲霉素粗提品。本发明提出的提取方法，避免了传统工艺中的多种溶剂萃取、反萃等工序，操作可靠性高且简便，生产过程安全无污染、资源利用率高，生产成本低，又有利于环境保护，是一种绿色环保的提取烟曲霉素的方法。CN105622593ACN105622593A权利要求书1/1页1.一种烟曲霉素的提取方法，包括步骤：1)将烟曲霉素发酵液的pH值用盐酸、磷酸、硫酸中的一种调节为1～6.0，用弱极性或非极性大孔树脂吸附，所用大孔树脂的孔径为比表面积为100～1200m2/g，大孔树脂使用前用乙醇和水活化；2)吸附后的树脂置于层析柱中，用质量浓度15～30％的乙醇水溶液清洗；3)用无水乙醇或质量浓度50～98％的乙醇水溶液洗脱树脂，洗脱液经浓缩和干燥，得到烟曲霉素粗提品。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤1)中，将烟曲霉素发酵液的pH值调节为1～6.0，加入大孔树脂，发酵液和大孔树脂的体积质量比为15～20mL：1g；搅拌后过滤，过滤得到的树脂用水清洗。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤1)中，将烟曲霉素发酵液离心，分离出上清液，将上清液的pH值调节为1～6.0，活化后的树脂置于层析柱中，上清液以0.5～3倍床层体积/小时的速度流过层析柱。4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述层析柱的高径比为1～10。5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述大孔树脂的型号为D101，XAD-2，HP-20，SP825，SP850或SP700。6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤2)中乙醇水溶液以0.5～3倍床层体积/小时的速度流过层析柱。7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤3)中无水乙醇或乙醇水溶液洗脱树脂在层析柱中进行，无水乙醇或乙醇水溶液的体积为床层体积的2～4倍。8.根据权利要求1～7任一所述的提取方法，其特征在于，还包括对烟曲霉素粗提品的通过复溶后，经重新装填的层析柱进行二次纯化：烟曲霉素粗提品按照质量体积比40～50mg：1～2L，用30％的乙醇水溶液溶解，再次经过装填有大孔树脂的层析柱用无水乙醇或乙醇水溶液洗脱，洗脱液经避光浓缩和干燥，得到晶体；晶体按照质量体积比40～50mg：0.1～0.5mL溶于丙酮，加入烟曲霉素粗提品质量的0.5～1倍的环己胺，反应10～15min后冷却，过滤、挥干丙酮。2CN105622593A说明书1/4页一种烟曲霉素的提取方法技术领域[0001]本发明属于抗生素生产领域，具体涉及一种从发酵液中提取抗生素的方法。背景技术[0002]烟曲霉素(Fumagillin)由烟曲霉(Aspergillusfumigatus)的发酵培养液中分离得到具有多种活性的一种代谢产物。其结构式为：[0003][0004]这种物质具有抗生素活性，又有抑制血管生成作用，从而具有对肿瘤生长的治疗作用。此外，烟曲霉素的一系列衍生物还具有抗击疟原虫和孢子虫的作用。在养蜂业中烟曲霉素的是非常有效的治疗西方蜜蜂孢子虫病(Nosemaapis)的药物，在美国和加拿大等国家已经使用有近60年的历史。近些年研究显示，烟曲霉素还是潜在减肥药物，是治疗肥胖的有效药物。作为一种具有多种活性的药物，烟曲霉素在未来的使用更加广泛。因此，建立简单有效的烟曲霉素的提取和净化方法，制备烟曲霉素纯品，对于该药物的深入研究和利用有着重要的意义。[0005]由于烟曲霉素结构复杂，用有机合成的方法成本高，因此，目前烟曲霉素大多数从烟曲霉素的发酵液中提取和纯化获得。之前的专利和文献中主要使用液液萃取的方法来从发酵液中提取烟曲霉素，提取过程中大量使用二氯甲烷或氯仿，叔丁醇，丙酮和乙酸乙酯等有毒试剂，同时提取过程中大量的副产物比如高毒的胶霉毒素等需要经过重结晶等方法除去，步骤繁琐，不易控制。随着