一种鉴别椴树蜜真实性的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109752469A(43)申请公布日2019.05.14(21)申请号201811228827.2(22)申请日2018.10.22(71)申请人上海森蜂园蜂业有限公司地址201499上海市奉贤区柘林镇发工路999号申请人中国农业科学院蜜蜂研究所(72)发明人于富民张红城朱海龙乔江涛(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569代理人刘奇(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图1页(54)发明名称一种鉴别椴树蜜真实性的方法(57)摘要本发明提供了一种鉴别椴树蜜真伪的方法，属于食品检测技术领域，所述方法包括以下步骤：1)将待鉴蜂蜜与水混合溶解，调节pH值为6～7，获得样品溶液；2)将所述样品溶液过反相-阴离子交换固相萃取柱，用含10wt％甲酸的甲醇溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液；3)用高效液相色谱检测所述洗脱液，将检测到的物质图谱与椴树蜜多酚类成分的指纹图谱比对，若检测到物质的种类与椴树蜜多酚类成分的指纹图谱一致则为真椴树蜜；所述椴树蜜多酚类成分的指纹图谱为包括椴树素、反,反式脱落酸和顺,反式脱落酸的指纹图谱。本发明建立了一套灵敏、准确、高效、普适的椴树蜜真实性鉴定方法，完全解决了椴树蜜真实性识别问题。CN109752469ACN109752469A权利要求书1/2页1.一种鉴别椴树蜜真实性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将待鉴蜂蜜与水混合溶解，调节pH值为6～7，获得样品溶液；2)将所述样品溶液过反相-阴离子交换固相萃取柱，用含10wt％甲酸的甲醇溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液；3)用高效液相色谱检测所述洗脱液，将检测到的液相色谱图与真椴树蜜多酚类成分的指纹图谱比对，若检测到物质的种类与真椴树蜜多酚类成分的指纹图谱一致则为真椴树蜜；所述真椴树蜜多酚类成分的指纹图谱为包括椴树素、反,反式脱落酸和顺,反式脱落酸的指纹图谱。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)还包括高效液相色谱分离后，根据高效液相色谱图用外标法计算检测到的椴树素、反,反式脱落酸和顺,反式脱落酸在待鉴蜂蜜中的含量。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述椴树素在真椴树蜜中的含量＞45μg/100g。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述反,反式脱落酸在真椴树蜜中的含量＞15μg/100g。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述顺,反式脱落酸在真椴树蜜中的含量＞30μg/100g。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述的高效液相色谱检测的条件包括：流速为0.7ml/min；紫外检测器，检测波长为280nm；分离柱为C18柱，所述C18柱的规格为150×4.6mm,5μm；上样体积为20μl；流动相A为质量分数0.2％的乙酸水溶液；流动相B为质量分数0.2％的乙酸甲醇溶液；洗脱梯度程序为：[0～11)min，[0％～8％)流动相B；[11～14)min，[8％～10％)流动相B；[14～17)min，[10％～14％)流动相B；[17～24)min，(14％～20％]流动相B；[24～28)min，(20％～21％]流动相B；[28～30)min，(21％～22％]流动相B；[30～36)min，(22％～25％]流动相B；[36～41)min，(25％～30％]流动相B；[41～46)min，(30％～33％]流动相B；[46～55)min，33％流动相B；[55～60)min，(33％～34％]流动相B；[60～70)min，(34％～36％]流动相B；[70～80)min，(36％～40％]流动相B；[80～90)min，(40％～45％]流动相B；[90～100)min，(45～52％]流动相B。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述椴树蜜多酚类物质指纹图谱通过以下方法获得：取50～100份真椴树蜜样品，分别进行高效液相色谱检测，得到每一份样品的多酚类成分色谱图，将所有样品的多酚类成分色谱图导入中药指纹图谱软件，获得真椴树蜜中多酚类成分的指纹图谱。8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中外标法计算椴树素的标准曲线为y＝7134x-6569，其中x为检测物质的峰面积，y检测物质的含量；y的单位为ng。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中外标法计算反,反式脱落酸和顺,反式脱落酸的标准曲线为y＝4513x+135049，其中x为检测物质的峰面积，y检测物质的含量。10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待鉴蜂蜜与水的质量比为1：(3.5～2CN109752469A权利要求书2/2页4.5)。3CN109752469A说明书1/6页一种鉴别椴树