一种酸型槐糖脂的制备及纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113336807A(43)申请公布日2021.09.03(21)申请号202110558008.X(22)申请日2021.05.21(71)申请人南京理工大学地址210014江苏省南京市玄武区孝陵卫街道孝陵卫街200号(72)发明人龙旭伟唐玉景崔天佑(74)专利代理机构杭州求是专利事务所有限公司33200代理人邱启旺(51)Int.Cl.C07H15/10(2006.01)C07H1/06(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种酸型槐糖脂的制备及纯化方法(57)摘要本发明公开了一种酸型槐糖脂的制备及纯化方法，酸型槐糖脂由发酵所得的槐糖脂混合物在水溶液中经碱水解制得，将酸型槐糖脂碱性水溶液加入稀硫酸溶液中获得酸型槐糖脂沉淀，产物沉淀经乙醇提取和固液萃取进行分离纯化，最终获得高纯度的酸型槐糖脂产物。所述槐糖脂为绿色的生物表面活性剂，主要是由熊蜂生假丝酵母(Candidabombicola)发酵产生的次级代谢产物。本发明提供的酸化促沉淀结合乙醇提取和固液萃取的分离纯化工艺能有效地去除酸型槐糖脂粗品中的亲、疏水杂质，实现酸型槐糖脂的高效快速分离纯化，大量获得酸型槐糖脂产品。CN113336807ACN113336807A权利要求书1/1页1.一种酸型槐糖脂的制备及纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将槐糖脂溶解在2mol/L氢氧化钠水溶液中，充分混合，槐糖脂与氢氧化钠的摩尔比为1:10‑15，在90‑100℃下反应60‑100min，获得酸型槐糖脂的碱性水溶液；(2)将酸型槐糖脂碱性溶液加入浓度为0.10‑0.95mol/L的稀硫酸溶液中，酸型槐糖脂碱性水溶液与稀硫酸溶液的体积比为1:3‑20，获得酸型槐糖脂沉淀。(3)步骤(2)获得的酸型槐糖脂沉淀溶解在醇类溶剂中，加入pH调节剂来调节乙醇相pH至6‑7，通过静置或离心使固液两相分离，收集富含酸型槐糖脂的乙醇相；(4)将步骤(3)分离的钙盐固相经乙醇洗涤2‑4次，通过静置或离心使固液两相分离，回收含有酸型槐糖脂的乙醇相，合并步骤(2)和步骤(3)的乙醇相，通过旋转蒸发和真空干燥除去溶剂，获得酸型槐糖脂粗产物固体；(5)步骤(4)获得的酸型槐糖脂粗产物固体，加入乙酸乙酯和烷类溶剂充分混合，所述酸型槐糖脂粗产物固体与烷类溶剂、乙酸乙酯混合溶剂的质量体积比为3‑15:50，烷类溶剂与乙酸乙酯的体积比为0‑0.25:1，洗涤2‑4次后，静置或离心分离固液两相，获得酸型槐糖脂产物的固体；(6)步骤(5)中的产物固体经40‑50℃减压干燥后获得酸型槐糖脂纯品。2.根据权利要求2所述的酸型槐糖脂的制备及纯化方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述醇类溶剂优选为乙醇、甲醇；所述pH调节剂为能与硫酸根反应生成不溶盐沉淀的固体，所述pH调节剂优选为碳酸钙、碳酸氢钙、氢氧化钙和碳酸钡。3.根据权利要求2所述的酸型槐糖脂的制备及纯化方法，其特征在于，所述步骤(5)中，所述烷类溶剂优选为环己烷、正己烷、正庚烷、正辛烷和异辛烷。4.根据权利要求2所述的酸型槐糖脂的制备及纯化方法，其特征在于，所述步骤(2)中稀硫酸溶液的浓度优选为0.46～0.92mol/L。5.根据权利要求2所述的酸型槐糖脂的制备及纯化方法，其特征在于，所述步骤(2)中酸型槐糖脂碱性水溶液与稀硫酸溶液的体积比优选为1:8‑20。2CN113336807A说明书1/4页一种酸型槐糖脂的制备及纯化方法技术领域[0001]本发明涉及一种糖脂类生物表面活性剂的分离纯化新方法，尤其涉及一种酸型槐糖脂的制备及纯化方法。背景技术[0002]表面活性剂是一类由非极性的亲油基团和极性的亲水基团组成，能显著降低表(界)面张力的化合物。独特的两亲特性(亲水和亲油)使表面活性剂具有良好的分散、增溶、润湿等功能，素有“工业味精”的美誉。但目前使用的绝大多数表面活性剂都是基于石油化工所合成的化学表面活性剂，其排放到环境中会对土壤、水体和生物体带来不利的影响，严重危害环境和人体健康。生物表面活性剂是主要由微生物发酵生产的表面活性剂，具有低毒、可降解、生态安全和高表面活性等优点，在多领域内可替代化学表面活性剂。槐糖脂(Sophorolipids，SLs)是一类主要由熊蜂生假丝酵母(Candidabombicola)利用油脂和糖作为碳源发酵生产的糖脂类生物表面活性剂，也是目前最具应用潜力的生物表面活性剂之一。SLs分子内基团的差异使其有20种主要结构以及100多种次要结构，其中以脂肪链是否与糖原酯化成环将其分为主要的两大类：内酯型槐糖脂和酸型槐糖脂。与内酯型槐糖脂相比，酸型槐糖脂的脂肪酸链末端含有游离羧基(‑COOH)，从而使其具备pH敏感性；更重要的是，酸型槐糖