一种槐糖脂发酵液中异构产物的分离纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110330538A(43)申请公布日2019.10.15(21)申请号201910583672.2(22)申请日2019.07.01(71)申请人万华化学集团股份有限公司地址264006山东省烟台市经济技术开发区天山路17号(72)发明人石森黄长荣李晶黄真真王勤隆周芸孔令晓刘照任娟(51)Int.Cl.C07H13/06(2006.01)C07H1/06(2006.01)权利要求书1页说明书9页(54)发明名称一种槐糖脂发酵液中异构产物的分离纯化方法(57)摘要本发明涉及一种发酵法生产槐糖脂的产物分离纯化方法，包括以下步骤：1.发酵法生产槐糖脂结束发酵后先稀释发酵液，然后过滤分离菌体，得到含有槐糖脂的无菌液，2.无菌液通过树脂进行吸附，吸附结束后的树脂用洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，得到酸型槐糖脂纯品，3.经过树脂吸附后的无菌液加入絮凝剂，静置后进行固液分离，液体蒸干溶剂，即可得到内酯型槐糖脂纯品。本方法的槐糖脂总回收率大于92％，同时能够高效分别获得两种构型的槐糖脂产品，每种产品单一构型产物比例不低于98％；与传统分离方法相比，本发明分离纯化槐糖脂的工艺简单、无复杂设备、不使用有毒有害溶剂、三废量少、绿色环保。CN110330538ACN110330538A权利要求书1/1页1.一种发酵法生产槐糖脂的产物分离纯化方法，包含以下步骤：(1)使用工程菌发酵生产槐糖脂结束发酵后，用水稀释发酵液，之后分离菌体得到含槐糖脂的无菌液；(2)无菌液通过树脂进行吸附，吸附结束后用洗脱剂对树脂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩得到酸型槐糖脂产品；(3)收集经树脂吸附后的无菌液，加入絮凝剂，分离沉淀物和溶液，溶液除水，得到内酯型槐糖脂产品。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)结束发酵后，用3-5倍体积水稀释发酵液，然后用过滤方式除菌体，得到无菌液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的树脂选自大孔树脂、碱性阴离子树脂，所述大孔树脂优选D101型大孔吸附树脂，所述碱性阴离子树脂优选丙烯酸系弱碱性阴离子树脂；所述树脂的装填长径比为5：1-20：1，优选8：1-10：1；所述树脂的体积为待吸附无菌液总体积的1/50-1/10。4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中无菌液进行吸附时，流量控制为每小时1-5倍、优选2-3倍树脂体积。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中吸附结束后，用洗脱剂对树脂进行洗脱，碱性阴离子树脂的洗脱剂为浓度0.1-5wt％、优选0.5％-1.5wt％的氢氧化钠和/或氢氧化钾水溶液，大孔树脂的洗脱剂为乙醇。6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，洗脱剂用量为20-50倍树脂体积，洗脱剂流量为每小时5-20倍、优选8-10倍树脂体积。7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中洗脱液用减压蒸发的方式进行浓缩，最终得到槐糖脂浓度为30-50wt％的酸型槐糖脂产品，酸型槐糖脂比例不低于98％。8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)收集经树脂吸附后的无菌液，加入絮凝剂，静置待固体沉淀析出完毕后，分离沉淀物和液体，液体减压蒸发除去溶剂水，得到内酯型槐糖脂产品，内酯型槐糖脂比例不低于98％。9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的絮凝剂选自聚丙烯酸钠、聚丙烯酰胺、明胶、海藻酸钠中的一种或多种，絮凝剂加入的质量为经树脂吸附后的无菌液质量的0.1-1％、优选0.3-0.5％。10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，酸型和内酯型槐糖脂总收率不低于92％。2CN110330538A说明书1/9页一种槐糖脂发酵液中异构产物的分离纯化方法技术领域[0001]本发明属于分离纯化技术领域，具体涉及一种槐糖脂发酵液中异构产物的分离纯化方法。技术背景[0002]槐糖脂是一种生物表面活性剂，具有生物可降解性、低生态毒性、环境友好等特点，被广泛应用于各个领域。槐糖脂是由酵母菌大规模发酵生产的表面活性剂，发酵产量较高，可达400g/L，现已实现工业化生产。[0003]槐糖脂具有酸型和内酯型两种结构，如下式所示，A为酸型槐糖脂，B为内酯型槐糖脂。不同结构的槐糖脂具有不同理化性质，一般而言，内酯型槐糖脂有较好的降低表面张力的能力和抗菌活性，而酸型槐糖脂有较好的泡沫形成能力和溶解性。内酯型槐糖脂适用于油田采油、环境修复等领域，酸型槐糖脂适合用于日化及家庭护理领域。[0004][0005]目前，常规的工业化分离方式得到的槐糖脂为酸型和内酯型的混合物，如专利CN1839892B介绍了用乙酸乙酯萃取槐糖脂发酵液，之后减压蒸馏得到槐糖脂