紫红笛鲷精子冷冻保存方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN101965828A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN101965828A(43)申请公布日2011.02.09(21)申请号201010267789.9(22)申请日2010.08.31(71)申请人广西壮族自治区水产研究所地址530021广西壮族自治区南宁市青秀区青山路8号(72)发明人李咏梅陈秀荔彭敏蒋伟明杨春玲(74)专利代理机构广西南宁汇博专利代理有限公司45114代理人郭平香(51)Int.Cl.A01N1/02(2006.01)A01K61/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称紫红笛鲷精子冷冻保存方法(57)摘要本发明涉及一种涉及紫红笛鲷精子冷冻保存以及激活方法，包括紫红笛鲷精子采集、稀释、降温和冷冻，其特征在于：所述的冷冻保存是将紫红笛鲷精子采集以后用稀释液与抗冻剂对精子进行稀释与平衡，再采用分段逐步降温法进行冷冻保存；所述的激活方法是将解冻精液用海水激活精子，最后进行精子质量检测，对精子的动态和静态特征进行全面的量化分析，从而对精子质量作出准确的评价，得到存活率高、活力强的紫红笛鲷精子，使珍贵的野生资源和优异的生物种质能够有效地储存下来，并可以在人们需要时随时取用。CN1096582ACN101965828A权利要求书1/1页1.一种紫红笛鲷精子冷冻保存以及激活方法，包括紫红笛鲷精子采集、稀释、降温和冷冻，其特征在于：所述的冷冻保存是将紫红笛鲷精子采集以后用稀释液与抗冻剂对精子进行稀释与平衡，再采用分段逐步降温法进行冷冻保存；所述的激活方法是将解冻精液用海水激活精子，最后进行精子质量检测。2.根据权利要求1所述的紫红笛鲷精子冷冻保存以及激活方法，其特征在于：用稀释液与抗冻剂对精子进行稀释与平衡是将紫红笛鲷精液与稀释液和抗冻剂配比按1∶1～2的重量比例进行稀释。3.根据权利要求1所述的紫红笛鲷精子冷冻保存以及激活方法，其特征在于：分段逐步降温法进行冷冻保存是利用装有液氮的容器，通过控制样品距离液氮面的高度来控制降温速率，温度由0℃开始，每次降10-20℃，依次分段降至-80℃，最后平衡3～8分钟，降温完成后，将精子从程序降温仪中取出，放入液氮罐中，在-198℃中保存。4.根据权利要求2所述的紫红笛鲷精子冷冻保存以及激活方法，其特征在于：所述的稀释液是Hanks’、TS-2、TS-19和Cortland；所述的抗冻剂是重量含量为2％～20％的二甲亚砜(DMSO)。5.根据权利要求1所述的紫红笛鲷精子冷冻保存以及激活方法，其特征在于：所述的精子质量检测是利用计算机识别技术和图像处理技术，对精子的动态和静态特征进行全面的量化分析，检测精子的运动轨迹、运动速率、分布、精子外形、精子数量、粘稠度和活力。2CN101965828A说明书1/4页紫红笛鲷精子冷冻保存方法技术领域[0001]本发明属于精子冷冻技术领域，具体涉及紫红笛鲷精子冷冻保存方法。背景技术[0002]南海是世界第三大陆缘海，面积约350万km2，其中我国管辖海域面积约201万km2。由于其海域辽阔、水质优良、海洋资源丰富，鱼、虾、贝、藻等海洋生物种类、品种众多，总计约有4168种，约占全国相应类群种类的52.2％。随着全球经济的加快及南海周边国家竞相发展海洋经济，我国也加快南海区海洋资源的开发步伐。但是伴随着海洋经济的加快发展，我国已出现了渔业种质资源衰退；海域污染情况日趋严重；赤潮频频；近海生态环境恶化等问题，这些严重影响和制约我国海洋经济的健康发展。因此，保护好海洋生态环境的同时，我们也要注重保护原有野生资源、注重种质保存，为今后实现可持续发展提供途径。[0003]精子冷冻保存是长期保存动物种质资源的有效途径，在防止鱼类物种灭绝、鱼类遗传育种及苗种培育等方面都具有广阔的应用前景。笛鲷科鱼类及石斑鱼类和鲷科鱼类等都有性转化现象，例如石斑鱼有“先雌后雄”，勒氏笛鲷有“先雄后雌”的性转变过程，性逆转所需时间约2-5年，不同种类不同，巨石斑鱼长达6年以上才能性转变成功，这就增加了人工繁殖的难度。那么鱼类精子是否可以象家畜一样通过人工挤压成熟性腺来获得浓的鲜精呢。如果该方法获得成功，那么通过采用超低温冷冻保存精液技术把成熟雄鱼的精液冷冻保存，需要时拿出来进行人工授精，该方法不但就可以解决雄鱼不足的问题，亦可解决雌、雄亲鱼性成熟不同步配对时的难题。[0004]中国专利公开了一种鱼类精子超低温冷冻保存简易方法，申请号：200710051591.5，公开(公告)号：CN101088511申请(专利权)人：中国水产科学研究院长江水产研究所，地址：湖北省荆州市沙市区江汉北路41号，发明(设计)人：柳凌；张洁明；危起伟；郭峰；朱永久，摘要：鱼类精子超低温冷冻保存简易方法，它是将鱼类精子取出后，将精