新城疫病毒和鸭瘟病毒二重PCR检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103031385A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN103031385A(43)申请公布日2013.04.10(21)申请号201210056384.X(22)申请日2012.03.06(71)申请人广西壮族自治区兽医研究所地址530001广西壮族自治区南宁市友爱北路51号(72)发明人谢芝勋陈安莉谢丽基刘加波谢志勤庞耀珊邓显文范晴(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书66页页序列表序列表22页页附图附图11页页(54)发明名称新城疫病毒和鸭瘟病毒二重PCR检测试剂盒(57)摘要本发明公开了一种新城疫病毒和鸭瘟病毒二重PCR检测试剂盒。本发明提供的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。本发明的实验证明，一次PCR反应，能同时检测并鉴别出新城疫病毒与鸭瘟病毒，与依靠传统的病原分离鉴定与血清学试验相比，二重PCR具有特异性好、敏感性高、快速、简便等特点，在临床上具有很高的应用价值。CN10385ACN103031385A权利要求书1/1页1.检测新城疫病毒和鸭瘟病毒的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比为(0.1-0.2)∶(0.1-0.2)∶(1.5-2)∶1.87；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比具体为0.13∶0.13∶1.87∶1.87。3.检测新城疫病毒和鸭瘟病毒的PCR试剂，由权利要求1或2所述的引物组、PCR缓冲液和水组成；所述引物组中的引物1在所述PCR试剂中的终浓度具体为0.1-0.2μmol/L；所述引物组中的引物2在所述PCR试剂中的终浓度具体为0.1-0.2μmol/L；所述引物组中的引物3在所述PCR试剂中的终浓度具体为1.5-2μmol/L；所述引物组中的引物4在所述PCR试剂中的终浓度具体为1.5-2μmol/L；所述引物组中的引物1在所述PCR试剂中的终浓度进一步具体为0.13μmol/L；所述引物组中的引物2在所述PCR试剂中的终浓度进一步具体为0.13μmol/L；所述引物组中的引物3在所述PCR试剂中的终浓度进一步具体为1.87μmol/L；所述引物组中的引物4在所述PCR试剂中的终浓度进一步具体为1.87μmol/L。4.检测新城疫病毒和鸭瘟病毒的PCR试剂盒，包括权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂。5.权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂或权利要求4所述试剂盒在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有新城疫病毒和鸭瘟病毒产品中的应用。6.根据权利要求5所述应用，其特征在于：所述应用为用权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂或权利要求4所述试剂盒对所述待测样品进行二重PCR扩增。7.根据权利要求5或6所述应用，其特征在于：所述二重PCR扩增的退火温度为50℃-55℃，所述二重PCR扩增的退火温度具体为55℃。8.一种检测新城疫病毒的引物对A，由权利要求1或2所述的引物组中的所述引物1和所述引物2组成；或一种检测鸭瘟病毒的引物对B，由权利要求1或2所述的引物组中的所述引物3和所述引物4组成。9.权利要求8所述的引物对A在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有新城疫病毒产品中的应用；或权利要求8所述的引物对B在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有鸭瘟病毒产品中的应用。2CN103031385A说明书1/6页新城疫病毒和鸭瘟病毒二重PCR检测试剂盒技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及新城疫病毒和鸭瘟病毒二重PCR检测试剂盒。背景技术[0002]新城疫(NewcastleDiseases，简称ND)和鸭瘟(DuckPlague，简称DP)均常见于鸭、鹅等雁行目禽类的急性、败血性和高度接触性传染病，这两种疾病流行广泛，传播迅速，发病率和死亡率高，均是目前对世界范围水禽危害最为严重的疫病之一。给水禽业带来巨大的经济损失。这两种疾病呈急性败血症过程中都侵害神经系统，同时出现呼吸道症状，排绿色粪便，其临床表现、病理变化、流行病学等方面都十分相似，这两种疾病发生时，很容易混淆。目前对NDV和DPV的鉴别诊断主要依靠传统的病原分离鉴定与血清学试验