高纯度山茶苷A的制备及其质量控制方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102628839A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102628839A(43)申请公布日2012.08.08(21)申请号201210040708.0(22)申请日2012.02.22(71)申请人广西壮族自治区中医药研究院地址530022广西壮族自治区南宁市东葛路20-1号(72)发明人刘元刘布鸣宋志钊黄艳兰太进张宁宁(74)专利代理机构广西南宁明智专利商标代理有限责任公司45106代理人冯菁(51)Int.Cl.G01N30/06(2006.01)G01N30/88(2006.01)G01N30/90(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书66页页附图附图33页(54)发明名称高纯度山茶苷A的制备及其质量控制方法(57)摘要本发明公开了一种以山茶科杨桐属植物亮叶杨桐为原料，提供一种高纯度山茶苷A的制备方法、检测方法与用途，其方法是：先将山茶科杨桐属植物亮叶杨桐粉碎，用乙醇加热回流提取，乙醇提取物经硅胶柱层析，用醋酸乙酯-甲醇混合溶剂洗脱，用薄层色谱检测，收集含有山茶苷A的洗脱液，合并，减压浓缩，重结晶，得到山茶苷A粗结晶。再用反相硅胶C－18柱制备高效液相法分离，对所收集的每一份洗脱液利用分析型高效液相色谱检测，合并保留时间相同而且纯度在90%～98%之间和98%以上的山茶苷A组分，减压浓缩，即可分别得到纯度在90%～98%之间的山茶苷A和纯度大于98%的山茶苷A组分，并采用薄层色谱和液相色谱进行质量控制。该方法不仅能提高山茶苷A纯度，而且能降低生产成本。CN1026839ACN102628839A权利要求书1/1页1.一种高纯度山茶苷A的制备方法，其特征在于：包括以下工艺过程：取山茶科杨桐属植物亮叶杨桐的干燥叶子，粉碎，每公斤亮叶杨桐的干燥叶子用5－10倍重量的50－90％w/w的乙醇的提取2－8次，滤过，合并滤液，回收乙醇，得浸膏，经硅胶柱层析，用醋酸乙酯-甲醇梯度洗脱，收集含山茶苷A的流分，薄层色谱TLC检测合并，浓缩，氯仿－甲醇重结晶，即得纯度为重量含量80～90％的山茶苷A粗结晶；将粗结晶用制备高效液相色谱法分离纯化，色谱柱为C－18柱，利用乙腈-水为流动相洗脱，流速为5～10mL/min，检测波长为330nm，柱温为25℃－35℃，收集山茶苷A组分，并对所收集的每一份洗脱液利用HPLC检测，合并保留时间相同而且纯度在90%－98%之间和纯度大于98%以上的山茶苷A，减压浓缩，得到纯度90%－98%之间以及大于98%以上的山茶苷A；所述的醋酸乙酯-甲醇配比为：100:0～60:40；所述的氯仿-甲醇配比为：5:1～5:5；所述的制备高效液相色谱法的流动相乙腈-水配比为：15:85～50:50；所述的分析HPLC条件为：色谱柱为C－18柱；流动相为乙腈：0.2%磷酸溶液=20:80～50:50；检测波长为330nm；流速为0.6mL/min～1.5mL/min。2.如权利要求1所述的高纯度山茶苷A的质量控制方法，其特征在于：采用薄层色谱分析方法或HPLC分析方法，所述的薄层色谱分析方法：薄层板：聚酰胺薄膜；3种展开剂系统：系统（1）乙醇-丙酮-水重量比例7:5:6，系统（2）甲醇-冰醋酸-水重量比例9:0.5:0.5，系统（3）乙醇-水重量比例1:1；点样：取本品适量，用甲醇制1mg/mL的溶液，在同一聚酰胺薄膜上，按不同的点样量梯度点样，点样量分别为0.5微克、1微克、3微克、5微克、10微克；置展开缸分别展开，展距：15cm；定位：喷以3%三氯化铝乙醇溶液，晾干，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外灯（365nm）下检视；结果在薄层色谱中，可见蓝色的单一的荧光斑点，3种展开剂系统，5个不同浓度的梯度点样，均为单一斑点，未见杂质斑点。3.根据权利要求2所述的高纯度山茶苷A的质量控制方法，其特征在于：所述的液相色谱方法：色谱条件：色谱柱C－18，4.6×250mm，10微米；流速：0.6－1.5ml/min；进样量：10～20微升；面积归一化法定量；系统条件（1）流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液重量比例46:54-60:40；检测波长：330nm；系统条件（2）流动相：乙腈－0.2%磷酸溶液重量比例21:79－50:50；检测波长：330nm；系统条件（3）流动相：乙腈－0.2%磷酸溶液重量比例21:79－50:50；检测波长：260nm；含量与纯度测定：精密称取于105℃干燥至恒重的对照品适量，加80%甲醇水溶液制成每1ml含1mg的溶液，在测定条件下，进样20微升，注入液相色谱仪，用2个流动相溶剂系统分别记录色谱图至主成分的出峰保留时间的2.5倍以上，用面积归一化法计算含量，结果系统测定对照品含量在均98%以上；杂质检查，分别在不同系统记录