高纯度棒柄花苷A的制备及其质量控制方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103145775A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103145775103145775A(43)申请公布日2013.06.12(21)申请号201310022965.6G01N30/90(2006.01)(22)申请日2013.01.22(71)申请人广西壮族自治区中医药研究院地址530022广西壮族自治区南宁市东葛路20-1号(72)发明人刘元刘布鸣陈小刚黄艳宋志钊卢文杰文志云(74)专利代理机构广西南宁明智专利商标代理有限责任公司45106代理人冯菁(51)Int.Cl.C07H15/203(2006.01)C07H1/08(2006.01)G01N30/02(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书6页说明书6页附图3页附图3页(54)发明名称高纯度棒柄花苷A的制备及其质量控制方法(57)摘要一种以大戟科棒柄花属植物棒柄花叶为原料，提供一种高纯度棒柄花苷A的制备方法、检测方法与用途，其方法是：先将大戟科植物棒柄花叶粉碎，用乙醇加热回流提取，乙醇提取物经硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，用薄层色谱检测，收集含有棒柄花苷A的洗脱液，合并，减压浓缩，得到棒柄花苷A粗结晶；再用反相硅胶C-18柱制备高效液相法分离，对所收集的每一份洗脱液利用分析型高效液相色谱检测，合并保留时间相同而且纯度在重量90%～98%之间和98%以上的棒柄花苷A组分，减压浓缩，即可分别得到纯度在重量90%～98%之间的棒柄花苷A和纯度大于98%的棒柄花苷A组分，并采用薄层色谱和液相色谱进行质量控制。CN103145775ACN103457ACN103145775A权利要求书1/1页1.一种高纯度棒柄花苷A的制备方法，其特征在于：包括以下工艺过程：取大戟科棒柄花叶，粉碎，每公斤棒柄花的干燥叶子用5～10倍重量的体积浓度50～90％的乙醇回流提取2～8次，滤过，合并滤液，浓缩，回收乙醇，得浸膏，经硅胶柱层析，用氯仿-甲醇梯度洗脱，收集含棒柄花苷A的流分，薄层色谱TLC检测合并，浓缩，即得纯度为重量含量80～90％的棒柄花苷A粗结晶；将粗结晶用制备高效液相色谱法分离纯化，色谱柱为C-18柱，利用乙腈-水为流动相洗脱，流速为5～10mL/min，检测波长为255nm，柱温为25℃～35℃，收集棒柄花苷A组分，并对所收集的每一份洗脱液利用HPLC检测，合并保留时间相同而且纯度在重量90%～98%之间和纯度大于98%以上的棒柄花苷A，减压浓缩，得到纯度重量90%～98%之间以及大于98%以上的棒柄花苷A；所述的氯仿-甲醇体积配比为：100:0～50:50；所述的制备高效液相色谱法的流动相乙腈-水体积配比为：15:85～50:50；所述的分析HPLC条件为：色谱柱为C-18柱；流动相为体积比：乙腈：水溶液=20:80～50:50；检测波长为255nm；流速为0.6mL/min～1.5mL/min。2.如权利要求1所述的高纯度棒柄花苷A的质量控制方法，其特征在于：采用薄层色谱分析方法或HPLC分析方法，所述的薄层色谱分析方法：薄层板：硅胶G板；3种展开剂系统：体积比：系统（1）醋酸乙酯-石油醚（60～90℃）（1:1），系统（2）苯-丙酮（2:1），系统（3）氯仿-甲醇（7:3）；点样：取本品适量，用甲醇制1mg/mL的溶液，在同一硅胶G板上，按不同的点样量梯度点样，点样量分别为20mg、40mg、60mg、80mg、100mg；置展开缸分别展开，展距：15cm；定位：喷以10%乙醇磷钼酸溶液，晾干，在105℃烘至斑点显色清晰，置白灯下检视；结果在薄层色谱中，可见蓝色的单一的荧光斑点，3种展开剂系统，5个不同浓度的梯度点样，均为单一斑点，未见杂质斑点。3.根据权利要求2所述的高纯度棒柄花苷A的质量控制方法，其特征在于：所述的液相色谱方法：色谱条件：色谱柱C-18，4.6´250mm，10mm；流速：0.6～1.5mL/min；进样量：10～20mL；面积归一化法定量；系统条件（1）流动相：甲醇-水溶液体积比例30:70～60:40；检测波长：255nm；系统条件（2）流动相：乙腈-水溶液体积比例15:85～50:50；检测波长：255nm；系统条件（3）流动相：乙腈-水溶液体积比例15:85～50:50；检测波长：210nm；含量与纯度测定：精密称取于105℃干燥至恒重的对照品适量，加体积比80%甲醇水溶液制成每1mL含1mg的溶液，在测定条件下，进样20mL，注入液相色谱仪，用2个流动相溶剂系统分别记录色谱图至主成分的出峰保留时间的2.5倍以上，用面积归一化法计算含量，结果系统测定对照品含量在均98%以上；杂质检查，分别在不同系统记录的色谱图中，除溶剂峰外，杂质峰面积总和结果均小