水稻MYB家族转录因子OsMYB84基因编码序列及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102676544A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102676544A(43)申请公布日2012.09.19(21)申请号201210165148.1(22)申请日2012.05.25(71)申请人复旦大学地址200433上海市杨浦区邯郸路220号(72)发明人明凤张文政吕波李春雨金津(74)专利代理机构上海正旦专利代理有限公司31200代理人陆飞盛志范(51)Int.Cl.C12N15/29(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C07K14/415(2006.01)A01H5/00(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书77页页序列表序列表55页页附图附图77页页(54)发明名称水稻MYB家族转录因子OsMYB84基因编码序列及其应用(57)摘要本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种在水稻中表达的属于MYB类转录因子家族基因（记为OsMYB84）的编码序列及其应用。具体包括基因OsMYB84的克隆、含有该基因的表达载体构建、基因OsMYB84基因器官表达模式，不同激素、不同胁迫处理后OsMYB84的表达量的变化。本发明还公开了基因OsMYB84在水稻Nipponbare中过表达后，可以改变水稻的株高以及对ABA的敏感程度，并提高对高盐的抗性。该基因OsMYB84可用于植物品种改良。CN1026754ACN102676544A权利要求书1/1页1.一种分离出的DNA分子，其特征在于，为从水稻中克隆出的基因，记为OsMYB84，全长1209bp，其中开放阅读框为966bp，其核苷酸序列为SEQIDNO.1。2.一种如权利要求1所述的基因OsMYB84编码的蛋白质分子，其特征在于，该序列编码321个氨基酸残基，分子量35.339kDa，等电点为7.76，氨基酸序列为SEQIDNO.2。3.一对用于调取获得水稻样品中基因OsMYB84的引物序列，其特征在于，根据权利要求1所述基因OsMYB84设计，序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。4.一对用于构建pCAMBIA1304-OsMYB84载体的引物序列，其特征在于，根据权利要求1所述基因OsMYB84开放阅读框设计，含有BglⅡ/SpeⅠ酶切位点，序列如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示。5.一种检测水稻基因OsMYB84mRNA表达模式的方法，其特征在于利用权利要求1所述基因OsMYB84的核苷酸序列作为设计探针引物的保守区段，调取其序列的引物序列见SEQIDNO.7和SEQIDNO.8，对水稻cDNA样品进行Real-timePCR，然后检测该基因在花、茎、叶、根中的表达；样品为水稻的RNA经过逆转录后所得cDNA；其步骤如下：提取水稻不同器官的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQIDNO.7和SEQIDNO.8，进行定量PCR检测。6.一种检测水稻在低温、干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后，基因OsMYB84表达含量变化的方法，其特征在于具体步骤为：将水稻进行低温、干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后，提取水稻的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQIDNO.7和SEQIDNO.8，进行定量PCR检测。7.一种检测水稻Nipponbare在转入基因OsMYB84后，水稻中基因OsMYB84表达含量变化的方法，其特征在于具体步骤为：提取转入OsMYB84基因和野生型对照组水稻的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQIDNO.7和SEQIDNO.8，进行定量PCR检测。8.如权利要求1所述的水稻基因OsMYB84在植物品种改良中的应用。2CN102676544A说明书1/7页水稻MYB家族转录因子OsMYB84基因编码序列及其应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种在水稻中表达的MYB家族转录因子OsMYB84基因编码序列及其应用。具体包括：MYB家族转录因子OsMYB84基因的核苷酸编码序列的克隆，序列的同源比对，表达载体构建，对水稻此基因内源的不同器官、组织的空间表达模式，低温、干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后的表达模式变化进行分析鉴定，以及转化此基因于水稻Nipponbare（OryzasativaJaponica）内，进行分子鉴定和胁迫实验，检测其基因表达量变化及抗性改变等。背景技术[0002]转录因子又称反式作用因子，是指能与真核基因启动子区域中的顺式作用元件发生特异结合，通过它们之间以及与其他相关蛋白之间的相互作用，激活或抑制转录，从而保证目的基因以特定的强度、在特定的时间与空间表达的蛋白质分子（刘蕾等，2008）。