拟南芥MYB家族转录因子AtMYB17基因、编码序列及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103695438103695438A(43)申请公布日2014.04.02(21)申请号201310685847.3(22)申请日2013.12.16(71)申请人复旦大学地址200433上海市杨浦区邯郸路220号(72)发明人明凤卢松冲张璇奚丹丹(74)专利代理机构上海正旦专利代理有限公司31200代理人陆飞盛志范(51)Int.Cl.C12N15/29(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C07K14/415(2006.01)A01H5/00(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书5页说明书5页序列表2页序列表2页附图4页附图4页(54)发明名称拟南芥MYB家族转录因子AtMYB17基因、编码序列及其应用(57)摘要本发明属于基因工程技术领域，具体为拟南芥MYB家族转录因子AtMYB17基因、编码序列及其应用。具体包括基因AtMYB17的克隆、含有该基因的表达载体构建、基因AtMYB17基因器官表达模式，不同激素、不同胁迫处理后AtMYB17的表达量的变化。本发明还公开了基因AtMYB17在拟南芥中过表达后，可以改变拟南芥对盐敏感程度。该基因AtMYB17可用于植物品种改良。CN103695438ACN10369548ACN103695438A权利要求书1/1页1.一种分离出的DNA分子，其特征在于，为从拟南芥中克隆出的基因，记为AtMYB17，全长1737bp，其核苷酸序列为SEQIDNO.1。2.一种如权利要求1所述的基因AtMYB17编码的蛋白质分子，其特征在于，该序列编码299个氨基酸残基，氨基酸序列为SEQIDNO.2。3.一对用于调取获得拟南芥样品中基因AtMYB17的引物序列，其特征在于，根据核苷酸序列为SEQIDNO.1所示基因AtMYB17设计，序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。4.一种检测拟南芥基因AtMYB17mRNA表达模式的方法，其特征在于利用SEQIDNO.1所示基因AtMYB17的核苷酸序列作为设计探针引物的保守区段，调取其序列的引物序列：SEQIDNO.5和SEQIDNO.6，对拟南芥cDNA样品进行Real-timePCR，然后检测该基因在花、茎、叶、根中的表达；样品拟南芥的RNA经过逆转录后所得cDNA；其步骤如下：提取拟南芥不同器官的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA；利用引物SEQIDNO.5和SEQIDNO.6，进行定量PCR检测。5.一种检测拟南芥在高低温、PEG、高盐胁迫以及植物激素处理后，基因AtMYB17表达含量变化的方法，其特征在于具体步骤为：将拟南芥进行高低温、PEG、高盐胁迫以及植物激素处理后，提取拟南芥的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA；利用引物SEQIDNO.5和SEQIDNO.6，进行定量PCR检测。6.一种检测拟南芥在转入基因AtMYB17后，拟南芥中AtMYB17表达含量变化的方法，其特征在于具体步骤为：提取转入核苷酸序列为SEQIDNO.1所示的拟南芥基因AtMYB17和野生型对照组拟南芥的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQIDNO.5和SEQIDNO.6，进行定量PCR检测。7.一种核苷酸序列为SEQIDNO.1所示的拟南芥基因AtMYB17在植物品种改良中的应用。2CN103695438A说明书1/5页拟南芥MYB家族转录因子AtMYB17基因、编码序列及其应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种在拟南芥中表达的MYB家族转录因子AtMYB17基因编码序列及其应用。具体包括：MYB家族转录因子AtMYB17基因的核苷酸编码序列和启动子序列的克隆，表达载体的构建，对拟南芥此基因内源的不同器官、组织的空间表达模式，高低温、PEG、高盐胁迫以及植物激素处理后的表达模式变化进行分析鉴定，以及转化此基因于拟南芥内，进行分子鉴定和胁迫实验，检测其基因表达量变化及抗性改变等。背景技术[0002]MYB是植物转录因子中最大的家族之一，大多数植物的ＭＹＢ以在其N端含有一段约51-52个氨基组成的MYB结构域为共同特征，MYB蛋白的分类主要是根据这个高度保守的DNA结合结构域，这个结构域通常是由至多４个氨基酸残基序列的重复（R）组成，每一个都形成３个α-螺旋，每一个重复的第二个和第三个螺旋形成一个带有３个有规律的间隔色氨酸残基（或疏水的）的螺旋－转角－螺旋（HTH）结构，形成一个３Ｄ（HTH）疏水核心结构，对维持HTH的构型有极为重要的意义。[0003]MYB基因家族在不同的物种中存在结构和序列上的差