水稻AP2/EREBP家族转录因子OsAIL5基因编码序列及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103667308103667308A(43)申请公布日2014.03.26(21)申请号201210322514.X(22)申请日2012.09.02(71)申请人复旦大学地址200433上海市杨浦区邯郸路220号(72)发明人明凤张文政金津(74)专利代理机构上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙)31268代理人吴桂琴(51)Int.Cl.C12N15/29(2006.01)C12N15/11(2006.01)C07K14/415(2006.01)C12Q1/68(2006.01)A01H5/00(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书6页说明书6页序列表7页序列表7页附图7页附图7页(54)发明名称水稻AP2/EREBP家族转录因子OsAIL5基因编码序列及其应用(57)摘要本发明属于基因工程技术领域，涉及一种在水稻中表达的属于AP2/EREBP类转录因子家族基因，记为OsAIL5的编码序列及其应用。具体包括基因OsAIL5的克隆、含有该基因的表达载体构建、基因OsAIL5基因器官表达模式，不同激素、不同胁迫处理后OsAIL5的表达量的变化。本发明还公开了基因OsAIL5在水稻中花11中过表达后，可以改变水稻对NH4NO3的敏感程度。该基因OsAIL5可用于植物品种改良。CN103667308ACN103678ACN103667308A权利要求书1/1页1.一种分离出的DNA分子，其特征在于，为从水稻中克隆出的基因，记为OsAIL5，全长1488bp，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种如权利要求1所述的基因OsAIL5编码的蛋白质分子，其特征在于，该序列编码495个氨基酸残基，分子量53.556kDa，等电点为5.72，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。3.用于调取获得水稻样品中基因OsAIL5的引物序列，其特征在于，根据权利要求1所述基因OsAIL5设计，所述序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。4.用于构建pCAMBIA1304-OsAIL5载体的引物序列，其特征在于，根据权利要求1所述基因OsAIL5开放阅读框设计，含有BglⅡ/SpeⅠ酶切位点，所述序列如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示。5.一种检测水稻基因OsAIL5mRNA表达模式的方法，其特征在于，利用权利要求1所述基因OsAIL5的核苷酸序列作为设计探针引物的保守区段，调取其序列的引物序列为SEQIDNO.7和SEQIDNO.8，对水稻cDNA样品进行Real-timePCR，然后检测该基因在花、茎、叶、根中的表达；样品为水稻的RNA经过逆转录后所得cDNA；其步骤包括：提取水稻不同器官的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQIDNO.7和SEQIDNO.8，进行定量PCR检测。6.一种检测水稻在低温、干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后基因OsAIL5表达含量变化的方法，其特征在于，其包括步骤：将水稻进行低温、干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后，提取水稻的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQIDNO.7和SEQIDNO.8，进行定量PCR检测。7.一种检测水稻中花11在转入基因OsAIL5后水稻中基因OsAIL5表达含量变化的方法，其特征在于，其包括步骤：提取转入OsAIL5基因和野生型对照组水稻的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQIDNO.7和SEQIDNO.8，进行定量PCR检测。8.如权利要求1所述的水稻基因OsAIL5在改良植物品种中的应用。2CN103667308A说明书1/6页水稻AP2/EREBP家族转录因子OsAIL5基因编码序列及其应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域，涉及一种在水稻中表达的AP2/EREBP家族转录因子OsAIL5基因编码序列及其应用。具体涉及：AP2/EREBP家族转录因子OsAIL5基因的核苷酸编码序列的克隆，序列的同源比对，表达载体构建，对水稻此基因内源的不同器官、组织的空间表达模式，低温、干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后的表达模式变化进行分析鉴定，以及转化此基因于水稻中花11号内，进行分子鉴定和胁迫实验，检测其基因表达量变化及抗性改变等。背景技术[0002]研究报道，AP2/EREBP家族转录因子是植物所特有的，也是植物中最大的转录因子家族之一，根据所包含的AP2结构域的序列和重复数，AP2/EREBP家族转录因子可以分为AP2,RAV,DREB,ERF以及其他类共五个亚家族（Nole-WilsonS.etal.2005）。AP2/EREBP结构域是由大约57