拟南芥MYB家族转录因子AtMYB84基因、编码序列及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103667316103667316A(43)申请公布日2014.03.26(21)申请号201310695172.0(22)申请日2013.12.17(71)申请人复旦大学地址200433上海市杨浦区邯郸路220号(72)发明人明凤卢松冲奚丹丹张璇(74)专利代理机构上海正旦专利代理有限公司31200代理人陆飞盛志范(51)Int.Cl.C12N15/29(2006.01)C07K14/415(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12Q1/68(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书6页说明书6页序列表3页序列表3页附图6页附图6页(54)发明名称拟南芥MYB家族转录因子AtMYB84基因、编码序列及其应用(57)摘要本发明属于基因工程技术领域，具体为一种拟南芥MYB家族转录因子AtMYB84基因、编码序列及其应用。具体包括基因AtMYB84的克隆、含有该基因的表达载体构建、基因AtMYB84基因器官表达模式，不同激素、不同胁迫处理后AtMYB84的表达量的变化。本发明还公开了基因AtMYB84在的突变体对盐干旱等胁迫敏感，而过表达材料对上述胁迫表现出抗性，同时过表达株系的根系发达。该基因AtMYB84可用于植物品种改良。CN103667316ACN10367ACN103667316A权利要求书1/1页1.一种分离出的DNA分子，其特征在于，为从拟南芥中克隆出的基因，记为AtMYB84，全长1467bp，其核苷酸序列为SEQIDNO.1。2.一种分离出的DNA分子，其特征在于，为从拟南芥中克隆出的启动子，记为AtMYB84pro，全长2467，其核苷酸序列为SEQIDNO.2。3.一种基因AtMYB84编码的蛋白质分子，其特征在于，该序列编码310个氨基酸残基，氨基酸序列为SEQIDNO.3。4.一对用于调取获得拟南芥基因AtMYB84的引物序列，其特征在于，根据核苷酸序列为SEQIDNO.1的基因AtMYB84设计，序列如SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示。5.一对用于构建pCAMBIA2301-AtMYB84载体的引物序列，其特征在于，根据核苷酸序列为SEQIDNO.1的基因AtMYB84开放阅读框设计，含有BamHI/PstⅠ酶切位点，序列如SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示。6.一对用于构建1300-AtMYB84pro-GUS载体引物序列，其特征在于，根据核苷酸序列为SEQIDNO.2的启动子设计，含有SalI/BamHⅠ酶切位点，序列如SEQIDNO.6和SEQIDNO.7所示。7.一种检测拟南芥基因AtMYB84mRNA表达模式的方法，其特征在于利用核苷酸序列SEQIDNO.1作为设计探针引物的保守区段，调取其序列的引物序列SEQIDNO.8和SEQIDNO.9，对拟南芥cDNA样品进行Real-timePCR，然后检测该基因在花、茎、叶、根中的表达；样品为拟南芥的RNA经过逆转录后所得cDNA；其步骤如下：提取拟南芥不同器官的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQIDNO.8和SEQIDNO.9，进行定量PCR检测。8.一种检测拟南芥在低温、干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后，基因AtMYB84表达含量变化的方法，其特征在于具体步骤为：将拟南芥进行低温、干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后，提取拟南芥的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQIDNO.8和SEQIDNO.9，进行定量PCR检测。9.一种检测拟南芥Col-0在转入基因AtMYB84后，拟南芥中基因AtMYB84表达含量变化的方法，其特征在于具体步骤为：提取转入核苷酸序列为SEQIDNO.1的基因AtMYB84和野生型对照组拟南芥的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQIDNO.8和SEQIDNO.9，进行定量PCR检测。10.核苷酸序列为SEQIDNO.1的拟南芥基因AtMYB84在植物品种改良中的应用。2CN103667316A说明书1/6页拟南芥MYB家族转录因子AtMYB84基因、编码序列及其应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种在拟南芥中表达的MYB家族转录因子AtMYB84基因编码序列及其应用，具体包括：MYB家族转录因子AtMYB84基因的核苷酸编码序列的克隆，表达载体构建，对拟南芥此基因内源的不同器官、组织的空间表达模式，低温、干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后的表达模式变化进行分析鉴定，以及转化此基因于拟南芥Col-0内，进行分子鉴定和胁迫实验，检测其基因表达量变化及抗性改变等。背