碱性橙Ⅱ分子印迹固相萃取填料、固相萃取柱及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN102755881102755881B(45)授权公告日2014.11.05(21)申请号201210268083.3(56)对比文件CN101733082A,2010.06.16,实施例1.(22)申请日2012.07.30CN101177498A,2008.05.14,摘要.(73)专利权人广西民族大学地址530006广西壮族自治区南宁市大学东审查员刘亚娟路188号(72)发明人李小燕李梅雷福厚李鹏飞(74)专利代理机构广西南宁公平专利事务所有限责任公司45104代理人杨立华(51)Int.Cl.B01J20/285(2006.01)B01J20/26(2006.01)B01J20/30(2006.01)C08F220/06(2006.01)C08F2/44(2006.01)C08J9/28(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书5页说明书5页(54)发明名称碱性橙Ⅱ分子印迹固相萃取填料、固相萃取柱及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种碱性橙Ⅱ分子印迹固相萃取填料，它是以碱性橙Ⅱ为模板分子、丙烯酰胺为功能单体、马来松香乙二醇丙烯酸酯为交联剂、偶氮二异丁腈为引发剂制成的分子印迹聚合物微粒。该固相萃取填料对碱性橙Ⅱ分子的立体结构具有“记忆”功能，能实现对碱性橙Ⅱ的特异性、选择性分离和富集，将其装填成固相萃取柱，可用于检测食品中含碱性橙Ⅱ样品提取溶液中碱性橙Ⅱ的选择性分离、纯化和富集，对含碱性橙Ⅱ的食品样品实现了高灵敏度、高选择性的检测，回收率稳定，相对标准偏差小，具有操作更为简单、快速、高效等特点。CN102755881BCN102758BCN102755881B权利要求书1/1页1.一种碱性橙Ⅱ分子印迹固相萃取填料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：<1>将0.1～3mmol碱性橙Ⅱ用适量无水乙醇溶解，加入2～60mmol丙烯酰胺单体、3～90mmol交联剂马来松香乙二醇丙烯酸酯、0.1～1.2g偶氮二异丁腈、2～10mL大豆油、10～40mL乙酸乙酯，超声20min，形成均匀有机相溶液A；溶液B为质量浓度0.10%的十二烷基硫酸钠水溶液；取溶液B100～600mL置于三颈烧瓶中，将溶液A倒入溶液B中，加装搅拌器、冷凝管和温度计，室温下恒速210～250r/min搅拌20min；程序升温加热聚合，温度控制在75～95℃，反应3～5h，生成分子印迹聚合物；<2>抽滤步骤<1>的反应体系分离得到聚合物微粒，再将聚合物微粒置于滤纸筒中，以冰乙酸-无水乙醇溶液为洗脱剂，分别按体积比80/20、50/50、20/80、0/100的比例进行梯度洗脱，索氏提取除去碱性橙Ⅱ后，最后用蒸馏水洗去残留溶剂，室温下自然风干得到分子印迹聚合物微粒。2.根据权利要求1所述碱性橙Ⅱ分子印迹固相萃取填料的制备方法，其特征在于：所述程序升温加热聚合是75℃1h；接上分水器，85℃，待有机溶剂分馏完毕；95℃1h。3.使用权利要求1所得碱性橙Ⅱ分子印迹固相萃取填料制成的固相萃取柱在选择性分离、富集和纯化食品中碱性橙Ⅱ残留样品中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于包括以下步骤：<1>固相萃取柱装填好后，依次用1～3个柱体积的甲醇活化，再用1～3个柱体积的体积分数为45%的乙醇平衡；<2>取样品提取液注入固相萃取柱；<3>用0.5～1个柱体积的体积分数为20%的乙醇清洗；<4>最后用1个柱体积的无水乙醇洗脱，即得洗脱液，经0.45μm有机滤膜过滤后进行HPLC分析。2CN102755881B说明书1/5页碱性橙Ⅱ分子印迹固相萃取填料、固相萃取柱及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及食品安全检测技术领域，尤其是一种碱性橙Ⅱ分子印迹固相萃取填料、固相萃取柱及其制备方法和应用。背景技术[0002]碱性橙Ⅱ（BasicOrangeⅡ），化学名为2，4-二胺基偶氮苯，俗名“王金黄”，化学分子式为C12H12N4·HCl，分子量为248.5，由苯胺重氮化后，与间苯二胺偶合而制得，是一种偶氮类碱性工业染料。碱性橙为红褐色结晶性粉末或有绿色光泽的褐色块状晶体，主要用于皮革制品、纺织品及木制品的染色。据调查其具有高致癌、致畸变性等危害，中国、美国及欧盟等都禁止用作食品添加剂。[0003]在食品残留检测中，样品前处理过程对分析结果的确准性、可靠性至关重要。固相萃取（SolidPhaseExtraction，简称SPE）是近年发展起来的一种新型样品前处理技术，其结合了液固萃取和柱液相色谱技术的优点，主要用于样品的分离、纯化和富集，能更有效地将待测组分与样品基体或干扰物质分离，减少样品前处理步骤，具有使用有机溶剂量少，操作简单、快速、分离效率高等优势