具有内切葡聚糖酶活性的多肽.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN104540939A(43)申请公布日2015.04.22(21)申请号201380014582.2(22)申请日2013.03.15(30)优先权数据61/611,7652012.03.16US(85)PCT国际申请进入国家阶段日2014.09.16(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2013/0324402013.03.15(87)PCT国际申请的公布数据WO2013/138768EN2013.09.19(71)申请人BP北美公司地址美国德克萨斯州(72)发明人约翰·普兰德贾斯汀·T·斯蒂格(74)专利代理机构中原信达知识产权代理有限责任公司11219代理人杨青穆德骏(51)Int.Cl.权利要求书3页说明书17页C12N9/42(2006.01)序列表11页附图1页(54)发明名称具有内切葡聚糖酶活性的多肽(57)摘要本发明涉及具有内切葡聚糖酶活性的家族5的糖苷水解酶变体，编码所述家族5的糖苷水解酶变体的多核苷酸，包含所述多核苷酸的载体、宿主细胞，以及使用所述家族5的糖苷水解酶变体的方法。CN104540939ACN104540939A权利要求书1/3页1.一种家族5的糖苷水解酶变体，所述变体由野生型亲代多核苷酸的突变形式编码，所述突变形式与SEQIDNO：1的(cDNA)核苷酸序列具有至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高或完全的序列同一性，并包含至少一种下列核苷酸残基变化：157至159位处的核苷酸是TCT；175至177位处的核苷酸是AAG；175至177位处的核苷酸是CAT；181至183位处的核苷酸是CCT；190至192位处的核苷酸是AAT；208至210位处的核苷酸是ATG；259至261位处的核苷酸是CAT；259至261位处的核苷酸是ATG；274至276位处的核苷酸是GCT；547至549位处的核苷酸是TTG；550至552位处的核苷酸是GAG；574至576位处的核苷酸是AAT；589至591位处的核苷酸是GCT；595至597位处的核苷酸是ATG；598至600位处的核苷酸是GTT；和898至900位处的核苷酸是GCG；其中所述变体具有至少一种下列活性：内切葡聚糖酶活性，β-甘露聚糖酶活性，外切-1,3-葡聚糖酶活性，内切-1,6-葡聚糖酶活性，木聚糖酶活性和神经节苷脂内切糖苷酶活性；并且其中所述变体的活性高于由具有SEQIDNO：1的核苷酸序列的野生型亲代多核苷酸编码的多肽。2.权利要求1的家族5的糖苷水解酶变体，其中所述家族5的糖苷水解酶变体具有内切葡聚糖酶活性。3.一种表达盒、载体或克隆载体，其包含权利要求1的野生型亲代多核苷酸序列SEQIDNO：1的突变形式，其中任选地所述克隆载体包含病毒载体、质粒、噬菌体、噬粒、粘粒、福斯质粒、细菌噬菌体或人工染色体，并且任选地所述病毒载体包含腺病毒载体、反转录病毒载体或腺相关病毒载体，并且任选地所述克隆载体包含细菌人工染色体(BAC)、质粒、细菌噬菌体P1衍生载体(PAC)、酵母人工染色体(YAC)或哺乳动物人工染色体(MAC)。4.一种转化的细胞，其包含含有权利要求1的野生型亲代多核苷酸序列SEQIDNO：1的突变形式的核酸，其中任选地所述细胞是细菌细胞、哺乳动物细胞、真菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞或植物细胞。5.一种转化的细胞，其包含权利要求3的表达载体。2CN104540939A权利要求书2/3页6.权利要求5的转化的细胞，其中所述细胞是细菌细胞、哺乳动物细胞、真菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞或植物细胞。7.权利要求6的转化的细胞，其中所述细菌细胞选自运动发酵单胞菌(Zymomonasmobilis)、大肠埃希式杆菌(Escherichiacoli)和产酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)。8.权利要求6的转化的细胞，其中所述酵母细胞选自酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、葡萄汁酵母(Saccharomycesuvarum)、脆壁克鲁维酵母(Kluyveromycesfragilis)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)、假热带假丝酵母(Candidapseudotropicalis)和嗜鞣管囊酵母(Pachysolentannophilus)。9.权利要求6的转化的细胞，其中所述真菌细胞选自曲霉属(Aspergillus)、青霉属(Penicillium)、根霉属(Rhizopus)、金孢霉属(Chr