具有广谱活性的杀昆虫多肽及其用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106795525A(43)申请公布日2017.05.31(21)申请号201580055336.0(74)专利代理机构中国专利代理(香港)有限公(22)申请日2015.10.14司72001代理人唐华东黄希贵(30)优先权数据62/0642702014.10.15US(51)Int.Cl.C12N15/82(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2017.04.12(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2015/0555052015.10.14(87)PCT国际申请的公布数据WO2016/061208EN2016.04.21(71)申请人先锋国际良种公司地址美国依阿华州申请人纳幕尔杜邦公司(72)发明人A.阿巴德H.董J.里塞X.施权利要求书2页说明书45页序列表23页附图4页(54)发明名称具有广谱活性的杀昆虫多肽及其用途(57)摘要本公开提供了从苏云金芽孢杆菌菌株获得的编码具有对昆虫害虫(包括鳞翅目和鞘翅目昆虫)的杀虫活性的多肽的核酸及其变体和片段。本公开的具体实施方案提供编码杀虫蛋白的分离核酸、包含本发明实施方案的核酸的杀虫组合物、DNA构建体及转化的微生物和植物。这些组合物可在防治害虫特别是植物害虫的方法中使用。CN106795525ACN106795525A权利要求书1/2页1.一种变体Cry1J多肽，其包含在对应于SEQIDNO：2的第578位的残基处具有缬氨酸置换的氨基酸序列，其中所述变体Cry1J多肽相比于SEQIDNO：2的Cry1J多肽对蛋白水解降解的稳定性增强。2.根据权利要求1所述的变体Cry1J多肽，其中所述增强的稳定性在模拟胃液(SGF)测定中测量。3.根据权利要求1所述的变体Cry1J多肽，其中所述变体Cry1J多肽与SEQIDNO：2具有至少95％的同一性。4.根据权利要求1所述的变体Cry1J多肽，其中所述变体Cry1J多肽与SEQIDNO：4或SEQIDNO：8具有至少95％的同一性。5.根据权利要求1、2、3或4所述的变体Cry1J多肽，其中所述变体Cry1J多肽包含选自SEQIDNO：4和SEQIDNO：8的氨基酸序列。6.一种重组核酸分子，其编码根据权利要求1、2、3、4或5所述的变体Cry1J多肽。7.根据权利要求6所述的重组核酸分子，其中所述核酸序列已被优化以在植物中表达。8.根据权利要求7所述的重组核酸分子，其中所述核酸序列是已被设计用来在植物中表达的具有植物优选的密码子的合成核苷酸序列。9.根据权利要求6、7或8所述的重组核酸分子，其中所述核酸序列已被优化以在大豆中表达。10.根据权利要求6所述的重组核酸分子，其中所述核酸选自SEQIDNO：3和SEQIDNO：7。11.一种DNA构建体，其包含根据权利要求6至10中任一项所述的核酸分子和可操作地连接至所述核酸分子的异源调控元件。12.一种宿主细胞，其包含根据权利要求11所述的DNA构建体。13.根据权利要求12所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞为细菌细胞。14.根据权利要求12所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞为植物细胞。15.根据权利要求12所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞为大豆细胞。16.一种转基因植物，其包含根据权利要求12所述的宿主细胞。17.根据权利要求16所述的转基因植物，其中所述植物选自玉蜀黍、高粱、小麦、卷心菜、向日葵、番茄、十字花科植物物种、胡椒物种、马铃薯、棉花、水稻、大豆、甜菜、甘蔗、烟草、大麦和油菜。18.一种种子，其包含根据权利要求11所述的DNA构建体。19.一种组合物，其包含根据权利要求1、2、3、4或5中任一项所述的变体Cry1J多肽。20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述组合物包含1重量％至99重量％的所述变体Cry1J多肽。21.一种防治鳞翅目害虫群体的方法，其包括使所述群体与杀虫有效量的根据权利要求1-5中任一项所述的变体Cry1J多肽接触。22.一种杀灭鳞翅目害虫的方法，其包括使所述害虫接触或给所述害虫饲喂杀虫有效量的根据权利要求1-5中任一项所述的变体Cry1J多肽。23.一种产生具有杀虫活性的多肽的方法，其包括在编码所述变体Cry1J多肽的核酸分子表达的条件下培养根据权利要求12-15中任一项所述的宿主细胞。2CN106795525A权利要求书2/2页24.一种植物或植物细胞，所述植物或植物细胞在其基因组中稳定掺入根据权利要求11所述的DNA构建体。25.一种保护植物免遭昆虫害虫侵扰的方法，其包括向所述植物中引入根据权利要求10所述的DNA构建体。26.根据权利要求24所述的方法，其中所述昆虫害虫为大豆夜蛾(黄豆银纹夜蛾(Chrysodeixisincludens))。3CN1067