用于调节血红蛋白基因家族表达的组合物和方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN104583399A(43)申请公布日2015.04.29(21)申请号201380037598.5代理人郑斌彭鲲鹏(22)申请日2013.05.16(51)Int.Cl.C12N15/11(2006.01)(30)优先权数据61/647,9012012.05.16USC07H21/00(2006.01)61/785,9562013.03.14USA61K31/7125(2006.01)A61P7/06(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2015.01.14(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2013/0413822013.05.16(87)PCT国际申请的公布数据WO2013/173599EN2013.11.21(71)申请人RANA医疗有限公司地址美国马萨诸塞州申请人麻省总医院(72)发明人阿瑟·M·克里格罗梅什·苏布拉马尼安詹姆斯·麦克斯维根珍妮·T·李(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限权利要求书3页说明书61页公司11227序列表（电子公布）(54)发明名称用于调节血红蛋白基因家族表达的组合物和方法(57)摘要本发明的方面提供用于激活或增强血红蛋白基因(HBB、HBD、HBE1、HBG1或HBG2)的表达的单链寡核苷酸。另外的方面提供包含用于激活或增强血红蛋白基因的表达的单链寡核苷酸的组合物和试剂盒。还提供了用于使用这些单链寡核苷酸调节血红蛋白基因的表达的方法。本发明的另外的方面提供了选择用于激活或增强血红蛋白基因的表达的候选寡核苷酸的方法。CN104583399ACN104583399A权利要求书1/3页1.一种具有序列5’-X-Y-Z的单链寡核苷酸，其中X为任何核苷酸，Y为非为人微小RNA的种子序列的、长度为6个核苷酸的核苷酸序列，并且Z为长度为1至23个核苷酸的核苷酸序列，其中该单链寡核苷酸与血红蛋白基因的PRC2相关区的至少8个连续核苷酸互补。2.如权利要求1所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸不包含三个或更多个连续鸟苷核苷酸。3.如权利要求1或2所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸不包含四个或更多个连续鸟苷核苷酸。4.如权利要求1至3中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的长度为8至30个核苷酸。5.如权利要求1至4中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的长度为8至10个核苷酸，并且该PRC2相关区的该互补序列中除1、2或3个核苷酸之外的所有都为胞嘧啶或鸟苷核苷酸。6.如权利要求1至5中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的至少一个核苷酸为核苷酸类似物。7.如权利要求6所述的单链寡核苷酸，其中与不具有该至少一个核苷酸类似物的寡核苷酸相比较，该至少一个核苷酸类似物导致该寡核苷酸的Tm在1℃至5℃的范围内的升高。8.如权利要求1至7中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的至少一个核苷酸包含2’O-甲基。9.如权利要求1至8中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的每个核苷酸包含2'O-甲基。10.如权利要求1至8中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸包含至少一个核糖核苷酸、至少一个脱氧核糖核苷酸或至少一个桥连核苷酸。11.如权利要求11所述的单链寡核苷酸，其中该桥连核苷酸为LNA核苷酸、cEt核苷酸或ENA修饰的核苷酸。12.如权利要求1至6中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的每个核苷酸为LNA核苷酸。13.如权利要求1至6中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的这些核苷酸包括交替的脱氧核糖核苷酸以及2’-氟-脱氧核糖核苷酸。14.如权利要求1至6中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的这些核苷酸包括交替的脱氧核糖核苷酸以及2’-O-甲基核苷酸。15.如权利要求1至6中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的这些核苷酸包括交替的脱氧核糖核苷酸以及ENA核苷酸类似物。16.如权利要求1至6中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的这些核苷酸包括交替的脱氧核糖核苷酸以及LNA核苷酸。17.如权利要求13至16中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的5’核苷酸为脱氧核糖核苷酸。18.如权利要求1至6中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的这些核苷酸包括交替的LNA核苷酸以及2’-O-甲基核苷酸。19.如权利要求18所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的该5’核苷酸为LNA核苷2CN104583399A权利要求书2/3页酸。20.如权利要求1至8中任一项所述的单链寡核苷酸，其中该寡核苷酸的这些核苷酸包括通过脱氧核糖核苷酸的5’端和3’端中的每一个上的至少一个LNA核苷酸侧接的这些脱氧核糖核苷酸。21.如权利要求1至20中任一项所述的单链寡核苷酸，进一步包含至少两个核