用于控制基因表达的组合物和方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110506118A(43)申请公布日2019.11.26(21)申请号201880021897.2(74)专利代理机构广州三环专利商标代理有限(22)申请日2018.02.02公司44202代理人郝传鑫(30)优先权数据62/453,8072017.02.02US(51)Int.Cl.C12N15/82(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2019.09.27(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2018/0166082018.02.02(87)PCT国际申请的公布数据WO2018/144831EN2018.08.09(71)申请人杜克大学地址美国北卡罗来纳州达勒姆欧文路2812号(72)发明人董欣年乔治·格林胥国勇权利要求书2页说明书86页序列表110页附图112页(54)发明名称用于控制基因表达的组合物和方法(57)摘要本发明主要涉及组合物(包括构建体、载体，和细胞)以及用这种组合物控制基因表达的方法。更具体地，本发明涉及R基序序列和/或uORF序列在控制基因表达中的用途。CN110506118ACN110506118A权利要求书1/2页1.一种DNA构建体，其包含异源启动子，所述异源启动子可操作地连接到编码RNA转录物的DNA多核苷酸，所述RNA转录物包含位于插入位点的5'端的5'调节序列，其中所述5'调节序列包含R基序序列。2.根据权利要求1所述的DNA构建体，其中所述的5’调节序列缺乏TBF1uORF序列。3.根据前述任一权利要求所述的DNA构建体，其中所述5'调节序列包含至少两个R基序序列。4.根据前述任一权利要求所述的DNA构建体，其中所述5'调节序列包含5至25个R基序序列。5.根据前述任一权利要求所述的DNA构建体，其中所述R基序序列被0个核苷酸分开。6.根据前述任一权利要求所述的DNA构建体，其中所述R基序包括SEQIDNO：113-293的任一序列、包含从1G：1A至1G：14A的任何比例的G和A核苷酸的、15个核苷酸长的多核苷酸，或其变体中的任意一个。7.根据前述任一权利要求所述的DNA构建体，其中所述的5'调节序列还包含编码SEQIDNO：1-38的任何一种uORF多肽的uORF多核苷酸,或其变体。8.根据前述任一权利要求所述的DNA构建体，其中所述的5'调节序列包含SEQIDNO：39-76的任何一种多核苷酸或其变体。9.根据前述任一权利要求所述的DNA构建体，其中所述的5'调节序列包含SEQIDNO：77-112、SEQIDNO:294-474的任何一种多核苷酸，或其变体。10.一种DNA构建体，其包含异源启动子，所述异源启动子可操作地连接到编码RNA转录物的DNA多核苷酸，所述RNA转录物包含位于插入位点的5'端的5'调节序列，其中所述5'调节序列包含编码SEQIDNO：1-38的任何uORF多肽的uORF多核苷酸，或其变体。11.根据权利要求10所述的DNA构建体，其中所述的5'调节序列包含SEQIDNO：39-76的任何一种多核苷酸，或其变体。12.根据权利要求10或11所述的DNA构建体，其中所述的5'调节序列包含SEQIDNO：77-112、SEQIDNO:294-474的任何一种多核苷酸，或其变体。13.根据前述任一权利要求所述的DNA构建体，其中所述插入位点包含编码异源多肽的异源编码序列。14.根据前述任一权利要求所述的DNA构建体，其中前述异源多肽包含植物病原体抗性多肽。15.根据权利要求13所述的DNA构建体，其中所述植物病原体抗性多肽选自snc-1和NPR1组成的组中。16.根据前述任一权利要求所述的DNA构建体，其中所述的异源启动子包括植物启动子。17.根据前述任一权利要求所述的DNA构建体，其中所述的异源启动子包括可被植物病原体或化学诱导剂诱导的植物启动子。18.一种包含权利要求1-17中任一项所述的DNA构建体的载体。19.根据权利要求18所述的载体，其中所述载体包含质粒。20.一种包含权利要求1-17中任一项所述的DNA构建体或权利要求18-19中任一项所述的载体的细胞。2CN110506118A权利要求书2/2页21.根据权利要求20所述的细胞，其中所述细胞为植物细胞。22.根据权利要求21所述的细胞，其中所述细胞选自由玉米植物细胞、豆类植物细胞、水稻植物细胞、大豆植物细胞、棉花植物细胞、烟草植物细胞、椰枣细胞、小麦细胞、番茄细胞、香蕉植物细胞、马铃薯植物细胞、胡椒植物细胞、苔藓植物细胞、欧芹植物细胞、柑橘植物细胞、苹果植物细胞、草莓植物细胞、油菜籽植物细胞、卷心菜植物细胞、木薯植物细胞，和咖啡植物细胞所组成的组。23.一种植物，其包含权利要求1-22的所述的DNA构