一种白花蛇舌草组培苗的快速繁殖方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105340739A(43)申请公布日2016.02.24(21)申请号201510757466.0(22)申请日2015.11.09(71)申请人广西壮族自治区药用植物园地址530023广西壮族自治区南宁市兴宁区长堽路189号(72)发明人韦坤华缪剑华李林轩李旻辉徐建平李翠王一诺胡雪阳(74)专利代理机构广西南宁公平专利事务所有限责任公司45104代理人黄永校(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种白花蛇舌草组培苗的快速繁殖方法(57)摘要一种白花蛇舌草组培苗的快速繁殖方法，包括如下步骤：(1)取白花蛇舌草未开裂果实作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体在超净工作台剥开，将种子接种到MS培养基中诱导发芽得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽；(4)将所述丛生芽置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；(5)取完整的带根苗进行炼苗后移植于苗床生长一个月，再移栽至大田。采用本发明所述的培养方法得到的白花蛇舌草丛生芽增殖系数达到25-30倍，获得的组培苗生根率达到98.0％，移栽苗床成活率达到95％，有效解决了白花蛇舌草的规模化育苗问题。CN105340739ACN105340739A权利要求书1/1页1.一种白花蛇舌草组培苗的快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取白花蛇舌草的成熟未开裂果实作为外植体，依次用2v/v％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1v/v％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体在超净工作台上剥开，将种子接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.3mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养30天得到丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-3.0mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(4)丛生芽生根培养：将步骤(3)中得到的丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中添加0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(5)炼苗与移栽：将步骤(4)获得带根的完整植株在室温下炼苗2-4天，待表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，移栽到苗床中，在苗床中生长一个月后移栽大田。2.根据权利要求1所述的白花蛇舌草组培苗的快速繁殖方法，其特征在于：所述移栽大田是在移栽时的温度条件为20-28℃，相对湿度75-80％，遮阳率为80％。2CN105340739A说明书1/4页一种白花蛇舌草组培苗的快速繁殖方法技术领域[0001]本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种白花蛇舌草组培苗的快速繁殖方法。背景技术[0002]白花蛇舌草(Oldenlandiadiffusa(Wild.)Roxb.)，始载于《广西中药志》，系茜草科(Rubiaceae)耳草属植物。其叶形似蛇舌，开白花，故别名蛇舌草、蛇利草、蛇总管、龙舌草等。其性甘寒、微苦，以全草供药用，具有清热解毒、利尿消肿、活血止痛的功能。临床应用广泛，主治恶性肿瘤、胃肠炎、阑尾炎、扁桃体炎、肺炎、泌尿系统感染等病症。生产于广东、广西、云南、福建、江苏、浙江等省区。目前商品白花蛇舌草以野生为主。由于广泛用于治疗癌症和肝炎等疾病，市场需求量剧增，中国药典2000年版己将白花蛇舌草作为中成药的原料药进行收载。野生资源经大量采集逐渐减少，供不应求，必须人工栽培，以满足市场供应。发明内容[0003]本发明的目的是提供一种白花蛇舌草组培苗的快速繁殖方法，它能够提高白花蛇舌草种苗的繁殖速度和质量，实现白花蛇舌草优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。[0004]本发明