一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN104160956104160956A(43)申请公布日2014.11.26(21)申请号201310185366.6(22)申请日2013.05.20(71)申请人广西俊宇原生本草生物科技有限公司地址533600广西壮族自治区百色市田阳县百育镇百色国家农业科技园区(72)发明人潘俊宇潘素芬翟全琼张雄森黄云辉梁燊(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书3页说明书3页(54)发明名称一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法(57)摘要本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种高效快速繁殖铁皮石斛组培苗的方法。具体包括：将各个阶段的激素浓度调整为最适浓度，然后将铁皮石斛种子在种子培养基中培养形成原球茎并进一步形成小芽，接着把铁皮石斛小芽转接于继代培养基中培养成具有2～3片真叶并带有1～2条幼根的小苗，再小苗转移到一步成苗培养基中培养成具有2～3条根、4片叶片、株高≥2.5cm、茎粗≥0.2cm的商品组培苗，最后将商品组培苗移栽至大棚内苗床上的基质中并培养至可采收。通过实施本发明，种子萌发时间短及萌发率高，芽苗生产快、污染低、变异少，商品组培苗粗壮、叶面展开、根系发达；从而实现铁皮石斛种苗快速无毒繁育的目的。CN104160956ACN104695ACN104160956A权利要求书1/1页1.一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法，其特征包括以下步骤：(1)将金线莲蒴果顶部用刀片切割一小部分，用清水清洗一遍表面，放置于组培瓶中，然后在无菌操作台中先用酒精浸泡30s，接着用氯化汞水溶液浸泡8min，最后用无菌水反复漂洗3～5次后即可完成消毒步骤；(2)将步骤(1)中得到金线莲种子放置于无菌的铝片上，用手术刀切开后播种于种子培养基中，在25±3℃、湿度≤60％、光照强度1000Lux-1500Lux、光照时间为10h/d的培养室中培养，培养1个月后种子萌发形成原球茎并进一步形成小芽；其中，上述的种子培养基组成为：+6-卡基嘌呤2.5mg/L～3mg/L+萘乙酸0.5mg/L～1mg/L+白糖30g/L+土豆200g/L+琼脂5.1g/L；(3)将步骤(2)得到的金线莲小芽转接于继代培养基中，在25±3℃、湿度≤60％、光照强度3000Lux-3500Lux、光照时间为11h/d的培养室中培养，1个月后小芽变成具有1～2片真叶并带有1～2条幼根的小苗；其中，上述中继代培养基组成为：MS+6-卡基嘌呤3.5mg/L～4mg/L+萘乙酸0.5mg/L～1mg/L+白糖30g/L+土豆200/L+琼脂5.1g/L；(4)将步骤(3)中得到的小苗转移到一步成苗培养基中，在25±3℃、湿度≤60％、光照强度3000Lux-3500Lux、光照时间为12h/d的培养室中培养，1个月后小苗长成具有3～4条根、3～4片叶、株高≥2.5cm、茎粗≥0.2cm的商品组培苗；其中，上述中一步成苗培养基组成为：+6-卡基嘌呤0.5mg/L～1mg/L+萘乙酸2.5mg/L～3mg/L+白糖20g/L+土豆200g/L+琼脂5.1g/L。2.根据权利要求1所述的一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的酒精体积浓度为75％。3.根据权利要求1所述的一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的氯化钙水溶液浓度为0.1％。2CN104160956A说明书1/3页一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法。背景技术[0002]金线莲别名金线兰、金丝草，为兰科开唇植物花叶兰属多年生珍稀中草药。它在民间使用范围较广，素有“药王”、“金草”、“神草”、“鸟人参”等美称。经有关部门测定发现，金丝莲中氨基酸组成、成分、含量及抗衰老活性微量元素的含量均高于国产和野生西洋参。几百年来作为民间常用草药，而且需求量越来越大。[0003]随着野生资源日渐匮乏，金线莲目前只能够依靠人工栽培来满足市场需求。[0004]金线莲属于兰科植物，其种子发芽率很低，所以通过有性繁殖来发展繁殖金线莲不是明智之举。当前通常采用的是无性繁殖，通过扦插进行繁殖，金线莲种苗成活率低，批量培养也不可行。大批量生产繁殖时，最行之有效的方法是通过组织培养来繁殖。[0005]目前，金线莲组培通常采用的是茎段繁殖技术，该技术的实施步骤为：茎段→消毒→初代培养→增殖培养→壮苗培养→生根培养→成品苗。但是现有技术存在有如下缺点：因为茎段繁殖需经历脱分化和分化过程，而该过程最易发生变异；同时，由于转接的次数之多、生长慢，成苗时间长，导致变异率高，很难保证种苗完全保留野生