H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105368988A(43)申请公布日2016.03.02(21)申请号201510988413.XC12N15/11(2006.01)(22)申请日2015.12.25(71)申请人广西壮族自治区兽医研究所地址530001广西壮族自治区南宁市友爱北路51号(72)发明人谢芝勋罗思思谢志勤黄莉谢丽基邓显文范晴黄娇玲张艳芳王盛曾婷婷(74)专利代理机构北京中誉威圣知识产权代理有限公司11279代理人王正茂(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用(57)摘要本发明属于禽类病毒检测技术领域，本发明公开了一种H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用。一种H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测引物组，包括2对特异性引物，分别是引物对H10-1和H10-2、引物对N8-1和N8-2，其分别具有如SEQIDNo.1至SEQIDNo.4所示的序列。发明人基于二重RT-PCR方法建立了可以鉴别H10N8亚型禽流感病毒的检测试剂盒。本发明所建立的H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR试剂盒特异性强、灵敏度高，一管可同时检测H10和N8亚型禽流感病毒，为H10N8亚型禽流感病毒的检测提供一种简便、快速和有效的检测试剂盒，对H10N8亚型禽流感病毒的流行病学调查及其鉴别诊断具有重要意义。CN105368988ACN105368988A权利要求书1/1页1.一种用于鉴定H10N8亚型禽流感病毒的引物组，其特征在于：包括2对特异性引物，分别是引物对H10-1和H10-2、引物对N8-1和N8-2，其分别具有如SEQIDNo.1至SEQIDNo.4所示的序列。2.一种用于鉴定H10亚型禽流感病毒的引物对，包括特异性引物H10-1和H10-2，它们分别具有序列表SEQIDNo.1至SEQIDNo.2的碱基序列。3.一种用于鉴定N8亚型禽流感病毒的引物对，包括特异性引物N8-1和N8-2，它们分别具有序列表SEQIDNo.3至SEQIDNo.4的碱基序列。4.一种H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测试剂盒，包括反转录试剂、PCR试剂、DEPC水和无RNA酶的超纯水，其特征在于：所述的PCR试剂中含有2对特异性引物，分别是引物对H10-1和H10-2、引物对N8-1和N8-2，其分别具有如SEQIDNo.1至SEQIDNo.4所示的序列。5.根据权利要求4所述的H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的特异性引物H10-1和H10-2，N8-1和N8-2在所述的PCR试剂中的终浓度为0.1-0.8μM。6.根据权利要求4所述的H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的反转录试剂每管16μL，其中5×ReverseTranscriptaseBuffer10μL、50pmol9merRandomPrimer2μL、10mMdNTPMixture2μL、40URibonucleaseInhibitor1μL、5U/μLAMVReverseTranscriptase1μL。7.根据权利要求4所述的H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的PCR试剂的体积为26.2μL/管，其中包含2×EasyTaqTMPCRSuperMix25μL，50μMH10-1和H10-2引物各0.2μL、50μMN8-1和N8-2引物各0.4μL。8.根据权利要求1所述的用于鉴定H10N8亚型禽流感病毒的引物组、权利要求2-3任一所述的引物对或权利要求4-7任一所述的H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测试剂盒在鉴别H10N8亚型禽流感病毒中的应用。2CN105368988A说明书1/6页H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明属于禽类病毒检测技术领域，尤其涉及一种H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测引物组、试剂盒，以及鉴定H10亚型禽流感病毒、N8亚型禽流感病毒的引物对或引物对组及其试剂盒。背景技术[0002]禽流感病毒(AvianInfluenzaVirus，AIV)根据表面糖蛋白(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)抗原性差异分为不同的亚型，目前已发现有18种HA亚型(H1-H18)和11种NA亚型(N1-N11)。AIV是一种有包膜、单股负链、分节段的RNA病毒，病毒基因组由8个分节段负链RNA组成。AIV基因组的