H10N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105385790A(43)申请公布日2016.03.09(21)申请号201510988022.8C12R1/93(2006.01)(22)申请日2015.12.25(71)申请人广西壮族自治区兽医研究所地址530001广西壮族自治区南宁市友爱北路51号(72)发明人谢芝勋罗思思谢志勤黄莉谢丽基邓显文范晴黄娇玲张艳芳王盛曾婷婷(74)专利代理机构北京中誉威圣知识产权代理有限公司11279代理人王正茂(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图1页(54)发明名称H10N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用(57)摘要本发明属于禽类病毒检测技术领域，本发明公开了一种H10N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用。发明人专门针对H10亚型禽流感病毒HA基因、N8亚型禽流感病毒NA基因和所有禽流感病毒M基因的保守序列，设计了3对特异性引物，组合成H10N8禽流感病毒三重RT-PCR检测试剂盒，一管检测即可确定为H10N8亚型禽流感病毒感染。利用本发明的引物对、引物对组或试剂盒，可以检测待测样品中是否含有H10N8亚型禽流感病毒、H10亚型禽流感病毒、N8亚型禽流感病毒和其它亚型禽流感病毒感染，对有效防控禽流感和切断其传播途径有重要意义，应用前景广阔。CN105385790ACN105385790A权利要求书1/1页1.一种H10N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测引物组，其特征在于：包括3对特异性引物，分别是引物对H10-1和H10-2、引物对N8-1和N8-2、引物对M-1和M-2，其分别具有如SEQIDNo.1至SEQIDNo.6所示的序列。2.一种用于鉴定H10亚型禽流感病毒的引物对，包括特异性引物H10-1和H10-2，它们分别具有序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.2的碱基序列。3.一种用于鉴定N8亚型禽流感病毒的引物对，包括特异性引物N8-1和N8-2，它们分别具有序列表SEQ.ID.No.3至SEQ.ID.No.4的碱基序列。4.一种通用鉴定所有亚型禽流感病毒的引物对，包括特异性引物M-1和M-2，它们分别具有序列表SEQ.ID.No.5至SEQ.ID.No.6的碱基序列。5.一种H10N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测试剂盒，包括反转录试剂、PCR试剂、DEPC水和RNase-free水，其特征在于：所述的PCR试剂中含有3对特异性引物，分别是引物对H10-1和H10-2、引物对N8-1和N8-2、引物对M-1和M-2，其分别具有如SEQIDNo.1至SEQIDNo.6所示的序列。6.根据权利要求5所述的H10N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的3对特异性引物H10-1和H10-2，N8-1和N8-2，M-1和M-2在所述的PCR试剂中的终浓度为0.1-0.8μM。7.根据权利要求5所述的H10N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的反转录试剂每管16μL，其中5×ReverseTranscriptaseBuffer10μL、50pmol9merRandomPrimer2μL、10mMdNTPMixture2μL、40URibonucleaseInhibitor1μL、5U/μLAMVReverseTranscriptase1μL。8.根据权利要求5所述的H10N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的PCR试剂每管27μL，其中2×EasyTaqTMPCRSuperMix25μL、50μMH10-1和H10-2引物各0.2μL、50μMN8-1和N8-2引物各0.4μL、50μMM-1和M-2引物各0.4μL。9.根据权利要求1所述的H10N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测引物组、权利要求2-4任一所述的引物对或权利要求5-8任一所述的H10N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测试剂盒在鉴别H10N8禽流感病毒、H10亚型禽流感病毒、N8亚型禽流感病毒及其它亚型禽流感病毒中的应用。2CN105385790A说明书1/8页H10N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明属于禽类病毒检测技术领域，尤其涉及一种H10N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测引物组、试剂盒，以及鉴定H10亚型禽流感病毒、N8亚型禽流感病毒、通用检测所有亚型禽流感病毒的引物对或引物对组及其试剂盒。背景技术[0002]禽流感病毒(AvianInfluenzaVirus，AIV)根