同时鉴别禽流感主要流行亚型的GeXP快速检测引物组、试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105349698A(43)申请公布日2016.02.24(21)申请号201510845245.9(22)申请日2015.11.27(71)申请人广西壮族自治区兽医研究所地址530001广西壮族自治区南宁市友爱北路51号(72)发明人谢芝勋李孟谢志勤罗思思谢丽基黄莉邓显文黄娇玲范晴张艳芳曾婷婷王盛(74)专利代理机构北京中誉威圣知识产权代理有限公司11279代理人王正茂(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书1页说明书12页附图2页(54)发明名称同时鉴别禽流感主要流行亚型的GeXP快速检测引物组、试剂盒及其应用(57)摘要本发明属于禽类病毒检测技术领域，本发明公开了一种同时鉴别禽流感主要流行亚型的GeXP快速检测引物组、试剂盒及其应用。发明人基于GeXP系统研究设计了7对特异性引物和1对通用引物，据此建立了同时鉴别禽流感病毒主要流行亚型的GeXP试剂盒。应用本发明可同时鉴别H5、H7和H9亚型及不同亚型组合禽流感病毒，灵敏度为102拷贝/μL。本发明具有高通量、特异性强、灵敏度高且快速等优点，对主要流行亚型禽流感的流行病学调查及其防控，保障养禽业的健康持续发展具有重要意义。CN105349698ACN105349698A权利要求书1/1页1.一种同时鉴别禽流感主要流行亚型的GeXP快速检测引物组，其特征在于：包括7对特异性引物和1对通用引物；7对特异性引物分别是引物对A1和A2、引物对B1和B2、引物对C1和C2、引物对D1和D2、引物对E1和E1、引物对F1和F2、引物对G1和G2；1对通用引物为Cy5-Tag-F和Tag-R；其分别具有如SEQIDNo.1至SEQIDNo.16所示的序列。2.一种同时鉴别禽流感主要流行亚型的GeXP快速检测试剂盒，包括cDNA、10×PCRbuffer、MgCl2、dNTP、JumpstartTaqpolymerase、7对特异性引物、1对通用引物和RNA-free水，其特征在于：所述的7对特异性引物、1对通用引物分别具有如SEQIDNo.1至SEQIDNo.16所示的序列。3.根据权利要求2所述的同时鉴别禽流感主要流行亚型的GeXP快速检测试剂盒，其特征在于：所述的7对特异性引物A1和A2、引物对B1和B2、引物对C1和C2、引物对D1和D2、引物对E1和E2、引物对F1和F2、引物对G1和G2在PCR反应体系中对应的的摩尔浓度分别为150nmol/L、100nmol/L、150nmol/L、100nmol/L、150nmol/L、200nmol/L、150nmol/L；所述的通用引物Cy5-Tag-F、Tag-R在PCR反应体系中的摩尔浓度为500nmol/L。4.根据权利要求3所述的同时鉴别禽流感主要流行亚型的GeXP快速检测试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒的总体积为25μL/管，其中包含：cDNA2.0μL，10×PCRbuffer2.5μL，MgCl22.5μL，dNTP1μL，JumpstartTaqpolymerase1.2μL，7对特异性引物混合物1.25μL，上、下游通用引物混合物1.25μL，RNA-free水补足至25μL。5.根据权利要求1所述的同时鉴别禽流感主要流行亚型的GeXP快速检测引物组或权利要求2-4任一所述的同时鉴别禽流感主要流行亚型的GeXP快速检测试剂盒在鉴别H5、H7、H9、N1、N2和N9主要流行亚型禽流感病毒中的应用。2CN105349698A说明书1/12页同时鉴别禽流感主要流行亚型的GeXP快速检测引物组、试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明属于禽类病毒检测技术领域，尤其涉及一种同时鉴别禽流感主要流行亚型的GeXP快速检测引物组、试剂盒及其应用。背景技术[0002]禽流感病毒(Avianinfluenzavirus，AIV)亚型众多，变异频繁，现已发现16种不同的血凝素亚型(HA)和9种不同的神经氨酸酶亚型(NA)。HA和NA结合可产生多种亚型的流感病毒。根据致病力不同，禽流感可分为高致病性和低致病性，能引起高致病性禽流感发生的主要是H5、H7亚型AIV。目前家禽体内流行广泛的低致病性禽流感主要以H9亚型为主。H5、H7、H9在家禽体内流行广泛，影响最大的是H5亚型HPAI，已在60多个国家的家禽和野鸟中检测出该亚型病毒，而且，在一些国家，主要是中国、印度、印度尼西亚、孟加拉国、埃及和越南，H5N1亚型禽流感已经发展成为危害养禽业健康发展的头号重要病原。不仅仅是H5N1，与H5亚型组合的还有近年经常爆发的H5N2亚型AI疫情，H