用于肝癌早期预警和筛查的试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105420370A(43)申请公布日2016.03.23(21)申请号201510958359.4(22)申请日2015.12.18(71)申请人四川大学地址610065四川省成都市武侯区一环路南一段24号(72)发明人覃扬黄元魏玲孙爱民李波孙成均梁伟波刘秋英俞小琴何靖炀(74)专利代理机构成都虹桥专利事务所(普通合伙)51124代理人梁鑫高芸(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书11页C12Q1/68(2006.01)序列表7页附图11页(54)发明名称用于肝癌早期预警和筛查的试剂盒(57)摘要本发明属于分子生物学(肿瘤筛查)领域，具体涉及一种可用于肝癌早期预警和筛查的技术。本发明属于分子生物学(肿瘤筛查)领域，具体涉及一种用于肝癌早期预警和筛查的技术。本发明要解决的技术问题是为肝癌早期预测提供一种新选择。本发明的技术方案是用于肝癌早期预警和筛查的试剂盒，包括扩增如下基因的引物：启动区CpG岛甲基化状态的RASSF相关区域家族1A基因(RASSF1A)、p16基因、胚肝血影蛋白(ELF)、细胞因子信号转导抑制因子3(suppressorsofcytokinesignaling)基因、分泌型卷曲相关蛋白1(secretedfrizzled-relatedprotein)基因和基因组重复序列LINE1。本发明为本领域早期肝癌以及肝硬化预警和筛查提供了新的有效检测方法，且成本低，使用起来也非常方便，灵敏度高，特异性好，具有很好的应用前景。CN105420370ACN105420370A权利要求书1/1页1.用于肝癌早期预警和筛查的试剂盒，其特征在于：包括扩增如下基因的引物：启动区CpG岛甲基化状态的RASSF相关区域家族1A基因RASSF1A、p16基因、胚肝血影蛋白ELF、细胞因子信号转导抑制因子3基因SOCS3、分泌型卷曲相关蛋白1基因SFRP1和基因组重复序列LINE1，引物序列下表；注：表中的M，即methylation，表示针对启动区CpG岛的甲基化特异性PCR引物；表中的U，即unmethylation，表示针对启动区CpG岛的非甲基化特异性PCR引物。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的引物按照RASSF1A：p16：SFRP1：ELF摩尔比＝4：2：2：3，SOCS3：LINE1摩尔比＝30：1分别配制使用；或按照RASSF1A：p16：SFRP1：ELF：SOCS3：LINE摩尔比＝4：2：2：3：6：0.5的比例配制使用；(3：2：2：2≤RASSF1A：p16：SFRP1：ELF摩尔比＝4：2：2：3≤6：2：2：4；30：0.5≤SOCS3：LINE1摩尔比＝30：1≤30：1.2；3：2：2：2：6：0.2≤RASSF1A：p16：SFRP1：ELF：SOCS3：LINE摩尔比＝4：2：2：3：6：0.5≤5：2：2：4：6：0.8)3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：将RASSF1A、p16、SFRP1、ELF、SOCS3和LINE的引物混合使用时，采用毛细管电泳对扩增产物进行分离。4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：将RASSF1A、p16、SFRP1、ELF、SOCS3和LINE的引物分为RASSF1A、p16、SFRP1和ELF混合，SOCS3和LINE1混合使用时，采用PAGE对扩增产物进行分离。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：PAGE电泳后采用银染显色法。6.如权利要求1～5任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述引物的扩增条件如下：94℃30s，30cycles；95℃预变性15min，63℃退火1min30s，72℃延伸10min；72℃1min30s。2CN105420370A说明书1/11页用于肝癌早期预警和筛查的试剂盒技术领域[0001]本发明属于分子生物学(肿瘤筛查)领域，具体涉及一种可用于肝癌早期预警和筛查的技术。背景技术[0002]人原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)指肝细胞或肝内胆管细胞发生的癌,为我国常见恶性肿瘤之一,其死亡率在消化系统恶性肿瘤中列第三位,仅次于胃癌和食管癌。我国约有1.2亿乙型肝炎表面抗原携带者,每年约有300万人可能从急性乙型肝炎发展为慢性肝炎,死于肝病30万人,其中12万人死于HCC，在我国，乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染是导致发展原发性肝癌(HCC)的最直接原因，大多数肝癌患者的发病进展过程表现为慢性肝炎(chronichepatitis,CH)、肝硬化(livercirrhosis,LC)到HCC的发展进程。而在全世界每年新发现的肝癌病人中，其中就有42.5％发生在中国，因此中国是一个肝癌大国。对于