用于早期诊断口腔肿瘤的体外筛查方法和试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112639473A(43)申请公布日2021.04.09(21)申请号201980024278.3马里亚罗萨里亚·波切里诺阿尔弗雷多德罗萨(22)申请日2019.04.01·(74)专利代理(30)优先权数据机构上海专利商标事务所有限公1020180000041372018.03.30IT司31100代理人陈扬扬陶家蓉(85)PCT国际申请进入国家阶段日2020.09.30(51)Int.Cl.G01N33/574(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据PCT/IB2019/0526622019.04.01(87)PCT国际申请的公布数据WO2019/186521EN2019.10.03(71)申请人玛丽娜·迪多梅尼科地址意大利那不勒斯申请人马里亚罗萨里亚·波切里诺阿尔弗雷多·德罗萨(72)发明人玛丽娜·迪多梅尼科权利要求书2页说明书8页附图6页(54)发明名称用于早期诊断口腔肿瘤的体外筛查方法和试剂盒(57)摘要本发明属于口腔肿瘤的早期诊断领域。特别地，本发明涉及用于诊断和/或预测口腔肿瘤发展的风险的方法，该方法包括使用免疫学试验例如ELISA(酶联免疫吸附试验)在细胞提取物中检测口腔肿瘤的某些标志物。本发明还涉及用于诊断和/或预测口腔肿瘤发展的风险的相关试剂盒。CN112639473ACN112639473A权利要求书1/2页1.一种用于预测对象的口腔肿瘤的发展风险和/或其诊断和/或预后和/或监测其进展和/或筛选其治疗的体外方法，包括以下步骤：a)在从对象，优选从对象的口腔获得的生物样品中至少检测和/或定量雄激素受体(AR)和雌激素受体(ER)；和b)与对照样品进行比较。2.如权利要求1所述的方法，其中在步骤a)中，还检测和/或定量上皮生长因子受体(EGF‑R)。3.如权利要求1或2所述的方法，其中，AR和/或ER和任选的EGF‑R的存在，和/或AR和/或ER和任选的EGF‑R相对于对照样品中的量更高的量指示对象处于发展口腔肿瘤的风险中或正患有口腔肿瘤。4.如权利要求1、2或3所述的方法，其中步骤a)包括：‑使所述生物样品与至少抗AR抗体和抗ER抗体和任选的抗EGF‑R抗体在一定条件下接触和孵育，所述条件使得如果存在AR和/或ER和/或EGF‑R，则AR和ER和任选的EGF‑R与所述抗体结合并且形成抗体‑抗原复合物；和‑检测和/或定量与抗体结合的AR和/或ER和/或EGF‑R，优选使用所述抗体的检测和/或定量手段。5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，对其中已经检测到和/或定量AR和/或ER和任选的EGF‑R的存在和/或抗AR抗体和/或抗ER抗体和任选的抗EGF‑R抗体的存在的对象进行进一步的口腔肿瘤诊断方法。6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述生物样品源自口腔的发炎区域。7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述生物样品是细胞，优选地经过细胞裂解，或者是组织样品或流体，例如唾液，血液或血清。8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述口腔肿瘤选自：口腔粘膜肿瘤，舌肿瘤，咽肿瘤，喉肿瘤，腭肿瘤，腺上皮肿瘤，鳞状细胞癌(SSC)，口腔表皮癌，喉癌，舌癌和唇癌。9.一种试剂盒，其包括：‑AR和ER和任选的EGF‑R的检测和/或定量手段；‑任选的对照手段。10.如权利要求9所述的试剂盒，包括：(a)至少抗AR抗体和抗ER抗体；(b)至少AR‑抗体复合物和ER‑抗体复合物的检测和/或定量手段。11.如权利要求10所述的试剂盒，还包括抗EGF‑R抗体和EGF‑R‑抗体复合物的检测和/或定量手段。12.如权利要求10或11所述的试剂盒，其中将抗AR抗体，抗ER抗体和任选的抗EGF‑R抗体固定在固体支持物上。13.如权利要求9‑12中任一项所述的试剂盒，其包括具有两个末端的装置，其中所述第一末端包含抗AR抗体、抗ER抗体和任选的抗EGF‑R抗体，并且所述第二末端包含用于从对象获取生物样品的刷，优选地，所述第一末端还包含阳性对照和/或阴性对照。14.如权利要求9‑13中任一项所述的试剂盒，包括至少缓冲溶液和/或裂解溶液和/或2CN112639473A权利要求书2/2页检测系统。15.如权利要求14所述的试剂盒，其中所述缓冲溶液和/或裂解溶液和/或检测系统设置在不同的孔中，优选放置在单个盒子中。16.如权利要求9‑15中任一项所述的试剂盒在进行权利要求1‑8中任一项所述的方法中的用途。17.如权利要求16所述的用途，包括以下步骤：‑将所述生物样品浸入裂解溶液中以获得第一溶液，如果样品中存在AR和/或ER和/或EGF‑R，则将其释放；‑将所述抗AR和抗ER抗体和任选的抗EGF‑R浸入所述第一溶液中以获得第一抗体‑抗原复合物；‑将所述