一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105950695A(43)申请公布日2016.09.21(21)申请号201610521201.5(22)申请日2016.06.29(71)申请人广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所地址541006广西壮族自治区桂林市雁山区雁山镇85号(72)发明人王磊李炳辰羊学荣符毓夏李典鹏(74)专利代理机构北京轻创知识产权代理有限公司11212代理人杨立付倩(51)Int.Cl.C12P33/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法(57)摘要本发明公开了一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法，属于药物前体或保健品技术领域。该方法包括如下步骤：步骤一：酶水解罗汉果皂苷V；步骤二：smith降解：(1)高碘酸钠氧化开裂；(2)硼氢化钠还原；(3)水解。本发明联用酶水解和氧化裂解两种方法，首先利用酶水解掉罗汉果皂苷V的部分糖残基，降低糖链的复杂度，再用氧化裂解的方法最终制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇两种罗汉果皂苷元。本发明的方法，适用于大量样品的制备，产率高，而且可以同时获得罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇两种苷元。CN105950695ACN105950695A权利要求书1/1页1.一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：酶水解罗汉果皂苷V取水解酶，溶于水中，所述水解酶与水的质量比例为1:100，取上清液，调节pH＝2-6，得到酶解液；取罗汉果皂苷V，采用所述酶解液溶解，所述罗汉果皂苷V与所述酶解液的质量比例为1:50-100，反应12-24h，加乙醇终止反应，过滤后，得到混合皂苷溶液；步骤二：smith降解(1)高碘酸钠氧化开裂在步骤一得到的混合皂苷溶液中，加入混合皂苷溶液体积1-3％的醋酸，搅拌下缓慢加入高碘酸钠溶液，所述罗汉果皂苷V与所述高碘酸钠摩尔比例为1:2-5，避光在20-80℃下搅拌反应，得到高碘酸钠氧化开裂后的反应液；(2)硼氢化钠还原蒸干步骤(1)得到的高碘酸钠氧化开裂后的反应液，残渣中加入乙醇，过滤溶液，滤液中缓慢加入硼氢化钠固体，所述罗汉果皂苷V与硼氢化钠的摩尔量比例为1:5-10，搅拌反应5-12h，得到硼氢化钠还原后的反应液；(3)水解在步骤(2)得到的硼氢化钠还原后的反应液中，加入水稀释，所述反应液与水的体积比例为1:0.5-1:2，加酸调节pH＝1，20-60℃水浴搅拌2-8h，加碱调节pH＝6-7，蒸出乙醇，用乙酸乙酯萃取,萃取次数≥1次，合并乙酸乙酯相，蒸干乙酸乙酯后，采用硅胶柱柱层析分离，分别得到所述罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇。2.根据权利要求1所述的一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤一中，所述pH调节的方式为柠檬酸、醋酸、磷酸中的一种。3.根据权利要求1所述的一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤一所得混合皂苷溶液经HPLC检测，混合皂苷溶液中的罗汉果皂苷V含量≥30％，则重复步骤一，直到混合皂苷溶液中的罗汉果皂苷V含量<30％。4.根据权利要求1所述的一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤二(3)中，所述反应液与水的体积比例为1:1。5.根据权利要求1所述的一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤二(3)中，所述加酸调节pH的方式为盐酸或硫酸。6.根据权利要求1所述的一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤二(3)中，所述加碱调节pH的方式为碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾或氢氧化钠中的一种。7.根据权利要求1所述的一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤二(3)中，所述乙酸乙酯萃取的次数为3次。8.根据权利要求1所述的一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤二(3)中，所述硅胶柱层析中展开剂为体积比8:1-2:1的二氯甲烷和乙酸乙酯的混合物。2CN105950695A说明书1/5页一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法技术领域[0001]本发明涉及一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法，属于药物前体或保健品技术领域。背景技术[0002]罗汉果是葫芦科藤本植物罗汉果(Siraitiagrosvenorii)的果实，具有清热润肺，利咽开音，滑肠通便的功效。罗汉果的主要有效成分为罗汉果皂苷(mogrosid