TIMM21突变基因、检测其的引物、试剂盒和方法以及其用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113265409A(43)申请公布日2021.08.17(21)申请号202110556490.3(22)申请日2021.05.21(71)申请人福州福瑞医学检验实验室有限公司地址350012福建省福州市晋安区新店镇猫岭路9号C区厂房9#厂房4F(72)发明人王开宇马鑫瑞(74)专利代理机构北京中济纬天专利代理有限公司11429代理人张磊(51)Int.Cl.C12N15/52(2006.01)C12N9/00(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12Q1/6883(2018.01)权利要求书2页说明书6页序列表3页附图3页(54)发明名称TIMM21突变基因、检测其的引物、试剂盒和方法以及其用途(57)摘要本发明涉及与LIMD相关的TIMM21突变基因、检测其的引物、试剂盒和方法以及其用途，突变TIMM21基因与人类基因组参考序列GRCh37相比具有以下突变中的一种：18号染色体物理位置为71816137的碱基由A突变为T、18号染色体物理位置为71822624的碱基由A突变为T；突变TIMM21基因的cDNA序列与SEQIDNO.1的序列相比具有如下突变中的一种：c.94A>T、c.448A>T；突变TIMM21蛋白的序列与SEQIDNO.2的序列相比具有以下突变中的一种：p.Lys32Ter、p.Arg150Ter。本发明为LIMD的早期分子筛查、家族遗传研究提供了重要的依据。CN113265409ACN113265409A权利要求书1/2页1.一种突变TIMM21基因或突变TIMM21蛋白，其特征在于：所述突变TIMM21基因与人类基因组参考序列GRCh37相比具有以下突变中的至少一种：18号染色体物理位置为71816137的碱基由A突变为T、18号染色体物理位置为71822624的碱基由A突变为T；所述突变TIMM21基因的cDNA序列与SEQIDNO.1的序列相比具有如下突变中的至少一种：c.94A>T、c.448A>T；所述突变TIMM21蛋白的序列与SEQIDNO.2的序列相比具有以下突变中的至少一种：p.Lys32Ter、p.Arg150Ter。2.一种检测权利要求1所述的突变TIMM21基因或突变TIMM21蛋白的方法，所述方法用于非诊断目的，其特征在于：所述方法包括检测TIMM21基因或TIMM21蛋白中是否存在突变位点，所述突变位点为如下至少一种：Chr18(GRCh37):g.71816137A>T，cDNA序列发生c.94A>T，p.Lys32Ter；Chr18(GRCh37):g.71822624A>T，cDNA序列发生c.448A>T，p.Arg150Ter。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述方法包括利用如下至少一组引物进行PCR扩增的步骤：SEQIDNO:3和SEQIDNO:4；SEQIDNO:5和SEQIDNO:6。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增反应程序包括：94‑100℃，1‑10min；94‑95℃，3‑5min，95‑96℃，25‑30s，58‑60℃，25‑30s，循环30‑40次，70‑72℃，1‑10min。5.一种检测突变TIMM21基因的试剂，其特征在于：所述试剂为核酸检测探针或引物；所述核酸检测探针与突变TIMM21基因互补；所述突变TIMM21基因与人类基因组参考序列GRCh37相比具有以下突变中的至少一种：18号染色体物理位置为71816137的碱基由A突变为T、18号染色体物理位置为71822624的碱基由A突变为T；所述突变TIMM21基因的cDNA序列与SEQIDNO.1的序列相比具有如下突变中的至少一种：c.94A>T、c.448A>T；所述核酸检测探针与突变TIMM21基因互补的区域包括选自如下至少一种的物理位置或cDNA序列位置：物理位置第71816137位、第71822624位；cDNA序列第94位、第448位；所述引物为具有如下序列的至少一组引物：SEQIDNO:3和SEQIDNO:4；SEQIDNO:5和SEQIDNO:6。6.一种检测突变TIMM21基因的试剂盒，其特征在于：它包括权利要求5所述的试剂。7.一种检测突变TIMM21基因或突变TIMM21蛋白的试剂在制备婴儿致死性线粒体疾病检测试剂中的应用；所述突变TIMM21基因与人类基因组参考序列GRCh37相比具有以下突变中的至少一种：2CN113265409A权利要求书2/2页18号染色体物理位置为71816137的碱基由A突变为T、18号染色体物理位置为71822624的碱基由A突变为T；所述突变TIMM21基因的cDNA序列与SEQIDNO.1的序列相比具有如下