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本发明涉及分离的核酸及其用途、引物组、试剂、试剂盒和检测方法。分离的核酸具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列或具有与SEQIDNO.1所示的核苷酸序列70%以上同源性的核苷酸序列,用于检测新金色分枝杆菌,引物组包括第一引物对上游引物序列:5’?CTGACCAATCACTACTACC?3’(SEQIDNO:2),第一引物对下游引物序列:5’?CCATGTACTGGTTCTTGG?3’(SEQIDNO:3),第一探针:5’?AGTTGATCGACAGCACCTCCG?3’(SEQIDNO:4)。本发明中分离的核酸在新金色分枝杆菌中的保守性高,通过检测上述核酸能准确鉴定出新金色分枝杆菌,且通过上述核酸设计的引物组具有特异性强、灵敏度高的优点。