一种制备和纯化虾青素的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108866144A(43)申请公布日2018.11.23(21)申请号201810814956.3(22)申请日2018.07.24(71)申请人杭州园泰生物科技有限公司地址311400浙江省杭州市富阳区场口镇上庄路3号第6幢(72)发明人李玉刚钟银珊应建航应佳丽(51)Int.Cl.C12P39/00(2006.01)C12P23/00(2006.01)C07C403/24(2006.01)C12R1/07(2006.01)C12R1/25(2006.01)C12R1/01(2006.01)C12R1/89(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称一种制备和纯化虾青素的方法(57)摘要本发明属于生物技术领域，公开了一种制备和纯化虾青素的方法，其包括如下步骤：步骤1）淀粉废水预处理，步骤2）制备混合菌液，步骤3）菌藻混合培养，步骤4）提取虾青素，步骤5）纯化虾青素。本发明方法通过从雨生红球藻中制备和纯化虾青素，提高了虾青素的纯度,收率达到90%以上。CN108866144ACN108866144A权利要求书1/1页1.一种制备和纯化虾青素的方法，其包括如下步骤：步骤1）淀粉废水预处理，步骤2）制备混合菌液，步骤3）菌藻混合培养，步骤4）提取虾青素，步骤5）纯化虾青素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1）淀粉废水预处理，包括如下：淀粉废水首先进入沉淀池，沉淀时间为12-24h，随后进入酸碱调节池，调节pH为7.0-7.5。3.根据权利要求1-2所述的方法，其特征在于，所述步骤2）制备混合菌液，包括如下步骤：将解淀粉芽孢杆菌培养液、植物乳杆菌培养液以及沼泽红假单胞菌培养液按照5-7:3-5:3-5的体积比混合得到复合菌液。4.根据权利要求1-3所述的方法，其特征在于，所述步骤3）菌藻混合培养，包括如下步骤：将经过预处理后的淀粉废水注入到生物反应池，首先将复合菌液按照1:（200-400）的体积比接入到淀粉废水，生物处理24-48h，然后取对数生长期的雨生红球藻，按照1:（100-200）的体积比接入到淀粉废水，光强在5000-8000lux，光暗比为12:12，培养时间为8-10天；然后将液体进行离心，离心速度为2000-3000rpm，离心时间为10-20min，收集沉淀物。5.根据权利要求1-4所述的方法，其特征在于，所述步骤4）提取虾青素，包括如下步骤：将沉淀物水洗两次，然后冷冻干燥得到粉末；然后按照1kg粉末：1-2L溶剂的量添加溶剂，超声破壁，超声功率为300W，每次超声时间为10s，间歇时间为10s，总超声时间为60min，再静置30min，然后3000rpm离心5min，收集上清液和沉淀，往沉淀中添加相同体积的丙酮，采用超声处理30min，超声功率为300W，每次超声时间为10s，间歇时间为10s，然后3000rpm离心3min，收集上清液；合并两次上清液，低温蒸干，残留物用乙醚溶解，然后加入相同质量的浓度为的0.1mol/L的KOH/甲醇溶液，置于4℃下皂化12h，得到虾青素粗提物。6.根据权利要求1-5所述的方法，其特征在于，所述步骤5）纯化虾青素，包括如下步骤：将虾青素粗提物通过大孔吸附树脂进行吸附处理，流速为2BV/h，先用水洗脱，将KOH和甲醇洗去，再用乙醇洗脱，一部分绿色色素被洗脱下来，最后用丙酮洗脱，解析速度为1BV/h，洗脱液分为绿色和红色两部分，收集红色部分，真空浓缩后得到膏状红色提取物。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述溶剂由乙酸乙酯和乙醇按照1:2的体积比混匀制得。8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂选自HPD100型或D-101型。2CN108866144A说明书1/6页一种制备和纯化虾青素的方法[0001]技术领域[0002]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种制备和纯化虾青素的方法。背景技术[0003]虾青素(astaxanthin)，化学名称为3,3′-二羟基-4,4′-二酮基-β,β′-胡萝卜素，为萜烯类不饱和化合物，化学分子式为C40H52O4，分子结构中有两个β-紫罗兰酮环，11个共轭双键，化学结构与β-胡萝卜素类似。虾青素广泛存在于自然界，如大多数甲壳类动物和鲑科鱼类体内，植物的叶、花、果，以及火烈鸟的羽毛中等，特别是虾、蟹、鱼、藻体、酵母和鸟类的羽毛中含量较高，是海洋生物体内主要的类胡萝卜素之一。[0004]虾青素世界上最强的天然抗氧化剂之一，有效清除细胞内的氧自由基，增强细胞再生能力，维持机体平衡和减少衰老细胞的堆积，由内而外保护细胞和DNA健康，从而保护皮肤健康，促进毛发生长，抗衰老、缓解运动疲劳、增强活力。自2008年