一种固液相结合制备齐考诺肽的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109021087A(43)申请公布日2018.12.18(21)申请号201811078797.1C07K1/02(2006.01)(22)申请日2018.09.17(71)申请人滨海吉尔多肽有限公司地址224555江苏省盐城市滨海县经济开发区沿海工业园黄海北路中山三路申请人上海吉尔多肽有限公司(72)发明人徐红岩竺剑峰(74)专利代理机构上海浦东良风专利代理有限责任公司31113代理人张劲风(51)Int.Cl.C07K14/435(2006.01)C07K1/20(2006.01)C07K1/06(2006.01)C07K1/04(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图2页(54)发明名称一种固液相结合制备齐考诺肽的方法(57)摘要本发明公开了一种固液相结合制备齐考诺肽的方法，主要解决现有合成方法存在的合成周期长，生产成本高，产品收率低不利于后期工业化放大的技术问题。本发明包括如下步骤：（1）固液相结合制备带修饰的多肽片段A；（2）固相法制备多肽片段B；（3）通过自然链接法，在液相条件下将修饰的多肽片段A链接到多肽片段B上，制备得到齐考诺肽线性肽粗品溶液；（4）在同一体系下加入氧化剂，氧化得到齐考诺肽粗品水溶液，再经高效液相色谱纯化冻干得到齐考诺肽精品。CN109021087ACN109021087A权利要求书1/2页1.一种固液相结合制备齐考诺肽的方法，其特征在于：包括以下步骤:（1）固液相结合制备带修饰的多肽片段A：{Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Sbzl}；（2）固相法制备多肽片段B：{Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2}；（3）通过自然链接法，在液相条件下将修饰的多肽片段A链接到多肽片段B上，制备得到齐考诺肽线性肽粗品溶液，即Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2；（4）在同一体系下加入氧化剂，氧化得到齐考诺肽粗品水溶液，再经高效液相色谱纯化冻干得到齐考诺肽精品。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤（1）以Fmoc-Asp(otbu)-二氯树脂为固相载体，按照Fmoc固相合成法，依次偶联以下保护氨基酸：Fmoc-Tyr(tbu)-OH,Fmoc-Met-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Arg(pbf)-OH,Fmoc-Ser(tbu)-OH,Fmoc-Cys(trt)-OH,Fmoc-Lys(boc)-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Gly-OH,Fmoc-Lys(boc)-OH,Fmoc-Gly-OH,Fmoc-Lys(boc)-OH,Boc-Cys(trt)-OH,得到Boc-Cys(trt)-Lys(boc)-Gly-Lys(boc)-Gly-Ala-Lys(boc)-Cys(trt)-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Leu-Met-Tyr(tbu)-Asp(otbu)-二氯树脂，经一次裂解得到全保护多肽Boc-Cys(trt)-Lys(boc)-Gly-Lys(boc)-Gly-Ala-Lys(boc)-Cys(trt)-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Leu-Met-Tyr(tbu)-Asp(otbu)-COOH，再液相缩合苄硫醇，得到Boc-Cys(trt)-Lys(boc)-Gly-Lys(boc)-Gly-Ala-Lys(boc)-Cys(trt)-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Leu-Met-Tyr(tbu)-Asp(otbu)-SBzl，再经二次裂解去除保护基，得到多肽片段A：{Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Sbzl}。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，固相偶联每一个氨基酸，以DMF为溶剂，选择HBTU/NMM作为缩合剂；液相缩合苄硫醇，以DMF或NMP为溶剂，选择HBTU/NMM或HCTU/DIEA中的一种为缩合剂，搅拌反应0.5-2小时。4.如权利要求2所述的方法，其特征在于：两次裂解中,一次裂解液配比为体积百分配比2%的TFA/DCM，二次裂解液的体积百分配比组成为87.5%TFA+5%苯甲硫醚+2.5%乙二硫醇+2.5%苯酚+2.5%水。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）以RnikAmideAM树脂为固相载体，按照Fmoc固相合成法，依次偶联以下保护氨基酸：F