一种固液相结合制备Bulevirtide的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115746102A(43)申请公布日2023.03.07(21)申请号202111025321.3(22)申请日2021.09.02(71)申请人深圳市健翔生物制药有限公司地址518118广东省深圳市坪山新区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园7号楼(72)发明人付玉清张利香姚林朱亮平(51)Int.Cl.C07K14/00(2006.01)C07K1/02(2006.01)C07K1/04(2006.01)C07K1/06(2006.01)权利要求书1页说明书20页(54)发明名称一种固液相结合制备Bulevirtide的方法(57)摘要本发明涉及多肽药物制备领域，公开了一种固液相结合制备Bulevirtide的方法，该方法包括以下步骤：采用固相合成四个保护的肽片段序列，将各肽片段在溶液体系中逐步偶联得到保护的Bulevirtide，然后裂解脱除保护基得到Bulevirtide粗肽。本发明通过采用特定的四个保护的肽片段液相合成Bulevirtide，不仅可以有效抑制或减少缺失肽、消旋肽等杂质的产生，提高产物的纯度和收率，而且在制备过程中可实现高通量、低成本、纯化易、效率高的特点，是一种具有广泛的实用价值和应用前景的Bulevirtide制备方法。CN115746102ACN115746102A权利要求书1/1页1.一种固液相结合制备Bulevirtide的方法，其特征在于，包括以下步骤：固相合成四个保护的肽片段序列，将各肽片段在溶液体系中逐步偶联得到保护的Bulevirtide，然后裂解脱除保护基得到Bulevirtide粗肽；其中，所述四个肽片段序列为：第Ⅰ肽片段序列为Bulevirtide序列中第1‑12位氨基酸；第Ⅱ肽片段序列为Bulevirtide序列中第13‑24位氨基酸；第Ⅲ肽片段序列为Bulevirtide序列中第25‑36位氨基酸；第Ⅳ肽片段序列为Bulevirtide序列中第37‑48位氨基酸。2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述制备方法具体为：(1)分别固相合成保护的第Ⅰ‑Ⅳ肽片段序列，并从树脂上裂解；(2)将步骤(1)中侧链保护的第Ⅰ肽片段序列和脱去α‑氨基保护基的带侧链保护的第Ⅱ肽片段序列在溶液体系中偶联得到侧链保护的第Ⅴ肽片段序列；(3)将步骤(2)中得到的侧链保护的第Ⅴ肽片段序列和脱去α‑氨基保护基的带侧链保护的第Ⅲ肽片段序列在溶液体系中偶联得到侧链保护的第Ⅵ肽片段序列；(4)将步骤(3)中得到的侧链保护的第Ⅵ肽片段序列和脱去α‑氨基保护基的带侧链保护的第Ⅳ肽片段序列在溶液体系中偶联得到侧链保护的Bulevirtide序列；(5)将步骤(4)制得的侧链保护的Bulevirtide裂解，脱除保护基得到Bulevirtide粗肽。3.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征在于，所述第Ⅰ～Ⅳ肽片段采用逐步偶联或片段偶联的方法进行合成。4.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征在于，所述第Ⅰ肽片段采用片段偶联的方法进行合成，所述片段为二肽、六肽片段或其组合，所述二肽片段为Myristoyl‑Gly、Asn‑Pro、Leu‑Gly；所述六肽片段为Thr‑Asn‑Leu‑Ser‑Val‑Pro。5.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征在于，所述第Ⅱ肽片段采用片段偶联的方法进行合成，所述片段为三肽、六肽片段或其组合，所述三肽片段为Phe‑Phe‑Pro、Ala‑Phe‑Gly；所述六肽片段为Asp‑His‑Gln‑Leu‑Asp‑Pro。6.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征在于，所述第Ⅲ肽片段采用片段偶联的方法进行合成，所述片段选自：Ala‑Asn‑Ser‑Asn‑Asn‑Pro、Asp‑Trp‑Asp‑Phe‑Asn‑Pro。7.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征在于，所述第Ⅳ肽片段采用片段偶联的方法进行合成，所述片段为Asn‑Lys‑Asp‑His‑Trp‑Pro。8.权利要求1或2制得的Bulevirtide经进一步纯化和冻干，得到Bulevirtide纯品。2CN115746102A说明书1/20页一种固液相结合制备Bulevirtide的方法技术领域[0001]本发明涉及多肽药物制备领域，具体涉及一种固液相结合制备Bulevirtide的方法。背景技术[0002]乙型肝炎病毒(HBV)是引起乙型肝炎的病原体。全球大约有20亿的慢性HBV感染患者，不过其中大多数都属于急性感染，人体的免疫系统能够迅速发挥作用而彻底清除乙肝病毒。另外有3.8亿感染患者属于慢性感染，病毒会藏匿于组织和器官中而无法被免疫系统和药物彻底清除，需长期治疗。[0003]丁型肝炎病毒(HDV)是HBV的卫星亚病毒，必须在HBV的辅助下才能