一种固液相结合制备维拉卡肽的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112521450A(43)申请公布日2021.03.19(21)申请号201910886294.5(22)申请日2019.09.19(71)申请人深圳市健翔生物制药有限公司地址518118广东省深圳市坪山新区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园7号楼(72)发明人胡鹏刘自成付玉清李文静龙娓芳(51)Int.Cl.C07K7/06(2006.01)C07K1/04(2006.01)C07K1/06(2006.01)C07K1/02(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称一种固液相结合制备维拉卡肽的方法(57)摘要本发明公开了一种固液相结合制备维拉卡肽的方法，采用固液相结合的方式，选择价格低廉的侧链保护氨基酸与酸敏感固相载体树脂合成主链肽树脂，选择性去除Cys侧链的保护基和树脂，活化主链Cys巯基，再与价格低廉的L-Cys-OH直接反应，最后裂解脱除Arg保护基得到维拉卡肽。合成杂质少，收率高，易于纯化，原料便宜易得，合成成本低，适合大规模生产。CN112521450ACN112521450A权利要求书1/1页1.一种固液相结合制备维拉卡肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：将固相载体树脂和Fmoc-D-Arg(X)-OH偶联得到Fmoc-D-Arg(X)-树脂；步骤2：取步骤1所得的Fmoc-D-Arg(X)-树脂，依次偶联D-Ala-OH、D-Arg(X)-OH、D-Arg(X)-OH、D-Arg(X)-OH、D-Ala-OH、D-Cys(Y)-OH，再将氮端氨基乙酰化，得到全保护的维拉卡肽主链树脂；步骤3：取步骤2所得的维拉卡肽主链树脂，加入裂解液1脱除保护基Y并切割树脂，加入活化剂活化主链Cys巯基，得到活化的维拉卡肽主链肽；步骤4：取步骤3所得的活化的维拉卡肽主链肽，溶于溶液，与L-Cys-OH偶联，得到全保护的维拉卡肽，加入裂解液2裂解得到维拉卡肽。2.根据权利要求1所述的制备维拉卡肽的方法，其特征在于：步骤1所述的固相载体树脂为酸敏感的氨基树脂，选自RinkAmide树脂、Sieber树脂。3.根据权利要求1所述的制备维拉卡肽的方法，其特征在于：X为Pbf，Y选自Trt、Mmt。4.根据权利要求1所述的制备维拉卡肽的方法，其特征在于：步骤3所述裂解液1为TFA、TIS、DCM的混合液。5.根据权利要求4所述的制备维拉卡肽的方法，其特征在于：所述TFA、TIS、DCM的体积比为0～10:0～20:70～100。6.根据权利要求1所述的制备维拉卡肽的方法，其特征在于：步骤4所述溶液选自水、乙腈/水、乙醇/水。7.根据权利要求1所述的制备维拉卡肽的方法，其特征在于：步骤4所述裂解液2为TFA、TIS、H2O的混合液。8.根据权利要求7所述的制备维拉卡肽的方法，其特征在于：所述TFA、TIS、H2O的体积比为80～100:0～10:0～10。2CN112521450A说明书1/6页一种固液相结合制备维拉卡肽的方法技术领域[0001]本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种固液相结合制备维拉卡肽的方法。技术背景[0002]继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT，简称继发性甲旁亢)，是指在慢性肾功能不全、肠吸收不良综合征、Fanconi综合征和肾小管酸中毒、维生素D缺乏或抵抗以及妊娠、哺乳等情况下，甲状旁腺长期受到低血钙、低血镁或高血磷的刺激而分泌过量的甲状旁腺激素(PTH)，以提高血钙、血镁和降低血磷的一种慢性代偿性临床表现，长期的甲状旁腺增生最终导致形成功能自主的腺瘤。[0003]维拉卡肽，英文名称Etelcalcetide，是一种钙敏感受体激动剂，由AMGENINC的全资子公司KaiPharmaceuticalsInc.开发，用于治疗成人慢性肾病患者做血液透析治疗引发的继发性甲状旁腺功能亢进，它可结合并激活甲状旁腺上的钙敏感受体，实现甲状旁腺激素(PTH)水平的降低。该药于2017年2月7日获得美国FDA批准上市，是12年来首个获批的用于治疗透析患者继发性甲状旁腺功能亢进的药物，其有效性及安全性优于已上市的同类产品西那卡塞。[0004]维拉卡肽的结构如下所示：[0005][0006]该化合物合成的关键在于分子间二硫键的构建，在目前关于该化合物的制备方法中，专利文献CN105504012公开了一种固相合成维拉卡肽的方法，先固相合成主链肽树脂，再选择性脱除Cys侧链保护基，接着与Y-Cys(NPys)-OH反应合成全保护肽树脂，最后裂解、纯化得到维拉卡肽。其中，氨基酸物料Y-Cys(NPys)-OH本身成本昂贵，并且固相合成形成二硫键时用量大，不易控制。专利文献CN108218957公开了一种固液相结合合成维拉卡肽的方