一种特立帕肽的合成方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109879954A(43)申请公布日2019.06.14(21)申请号201910240603.1(22)申请日2019.03.27(71)申请人哈尔滨吉象隆生物技术有限公司地址150025黑龙江省哈尔滨市利民开发区长青大街东、宝安路北(72)发明人冷国庆张琪苏宏健王丽莉田辉杨文龙余荣熹景文岩王艳张凤莲侯继元谢俊杨桦于通浩冷青(51)Int.Cl.C07K14/635(2006.01)C07K1/14(2006.01)C07K1/08(2006.01)C07K1/04(2006.01)权利要求书1页说明书7页(54)发明名称一种特立帕肽的合成方法(57)摘要本发明公开了一种特立帕肽的合成方法，包括以下步骤：先将树脂固相载体和Fmoc-Phe-OH偶联得到Fmoc-Phe-树脂；然后依照特立帕肽的氨基酸序列，从碳端开始使Fmoc-Phe-固相载体先偶联17位丝氨酸，得到肽树脂A；将肽树脂A中17位丝氨酸的游离羟基与Fmoc-Asn(Trt)-OH进行酯缩合，并脱除Fmoc保护基团，得到肽树脂B；然后再按照特立帕肽主链肽序，依次偶联其他具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，最终获得特立帕肽树脂，经过裂解得到特立帕肽粗肽；最后将特立帕肽粗肽进行分离纯化，冻干，得到特立帕肽纯品。该方法制备得到的特立帕肽纯品纯度在99％以上，总收率最高为52.3％，最大单一杂质在0.12％以下。CN109879954ACN109879954A权利要求书1/1页1.一种特立帕肽的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在活化试剂和偶联试剂的作用下，将树脂固相载体和Fmoc-Phe-OH偶联得到Fmoc-Phe-树脂；(2)在活化试剂和缩合试剂的作用下，依照特立帕肽的氨基酸序列，从碳端开始使Fmoc-Phe-固相载体先偶联17位丝氨酸，得到肽树脂A；(3)将步骤(2)得到的肽树脂A中17位丝氨酸的游离羟基与Fmoc-Asn(Trt)-OH进行酯缩合，并脱除Fmoc保护基团，得到肽树脂B；(4)然后再按照特立帕肽主链肽序，将步骤(3)中得到的肽树脂B依次偶联其他具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，每次延伸偶联后均得到对应的肽树脂，最终获得特立帕肽树脂，经过裂解试剂裂解得到特立帕肽粗肽；(5)将步骤(4)中得到的特立帕肽粗肽进行分离纯化，冻干，得到特立帕肽纯品。2.根据权利要求1所述的一种特立帕肽的合成方法，其特征在于，步骤(1)中，所述活化试剂为1-羟基苯并三唑或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑；所述偶联试剂为N，N-二异丙基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶组成的双体系偶联试剂。3.根据权利要求1所述的一种特立帕肽的合成方法，其特征在于，步骤(1)中，所述树脂固相载体为Wang树脂或2Cl-CTC树脂，所述树脂固相载体的替代度为0.3-0.8mmol/g。4.根据权利要求1所述的一种特立帕肽的合成方法，其特征在于，步骤(1)中，所述活化试剂与树脂固相载体的摩尔比为1-6∶1，所述偶联试剂与树脂固相载体的摩尔比为1-5∶1，所述Fmoc-Phe-OH和树脂固相载体的摩尔比为3-8∶1。5.根据权利要求1所述的一种特立帕肽的合成方法，其特征在于，步骤(2)中，所述活化试剂为1-羟基苯并三唑或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑；所述缩合试剂为N，N-二异丙基碳二亚胺或N，N-二环己基碳二亚胺。6.根据权利要求1所述的一种特立帕肽的合成方法，其特征在于，步骤(2)中，所述活化试剂与Fmoc-Phe-固相载体的摩尔比为1-6∶1，所述缩合试剂与Fmoc-Phe-固相载体的摩尔比为1-5∶1。7.根据权利要求1所述的一种特立帕肽的合成方法，其特征在于，步骤(3)中，所述Fmoc-Asn(Trt)-OH和肽树脂A的摩尔比为5-10∶1。8.根据权利要求1所述的一种特立帕肽的合成方法，其特征在于，步骤(3)中，所述酯缩合反应的温度为20-50℃，反应的时间为2-5h；所述脱Fmoc反应的温度为15-30℃，反应的时间为10-30min。9.根据权利要求1所述的一种特立帕肽的合成方法，其特征在于，步骤(4)中，所述裂解试剂是由体积百分比为70-85％的TFA、10-15％的EDT、余量为水组成的混合试剂。10.根据权利要求1所述的一种特立帕肽的合成方法，其特征在于，步骤(5)中，分离纯化的具体操作步骤为：将获得的特立帕肽粗肽干燥称重后用水溶解，经C18或C8柱纯化，流动相为1％TFA的水溶液或1％TFA的乙腈溶液，流速为200-500mL/min，检测波长为214nm，用HPLC跟踪收集所需要的流出液。2CN109879954A说明书1/7页一种特立帕肽的合成方法技术领域[0001]本发明涉及药物化学技术