一种特立帕肽的纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111057142A(43)申请公布日2020.04.24(21)申请号201910720543.3(22)申请日2019.08.06(66)本国优先权数据201811208920.72018.10.17CN(71)申请人深圳市健元医药科技有限公司地址518118广东省深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼806-810(72)发明人张利香付玉清黄荣宗舒遂智邱心敏(51)Int.Cl.C07K14/635(2006.01)C07K1/16(2006.01)C07K1/14(2006.01)权利要求书1页说明书10页附图4页(54)发明名称一种特立帕肽的纯化方法(57)摘要本发明提供了一种特立帕肽的纯化方法，包括以下步骤：1)以纯化水溶解特立帕肽粗品，控制粗品浓度并用0.45μm滤膜过滤。2)以聚合物填料为固定相的色谱柱进行梯度洗脱，以TFA水溶液为流动相A，以乙腈水溶液为流动相B。3)以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相的色谱柱进行梯度洗脱，以硫酸盐缓冲溶液为流动相A，以乙腈水溶液为流动相B。4)，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定的色谱柱，先以醋酸铵和乙腈，按一定的比例进行离子交换；再以醋酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱。5)将转盐后合格馏分，浓缩后上冻干。本发明采用液相自动化设备，利用不同色谱填料结合不同流动相，制备得到单杂小于0.1％，总杂小于0.2％的精肽，且纯化总收率高达70％以上，建立了一种纯度高、纯化收率高、且自动化程度高的特立帕肽纯化工艺。CN111057142ACN111057142A权利要求书1/1页1.一种特立帕肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：1)以纯化水溶解特立帕肽粗品，控制特立帕肽粗品浓度为50-100mg/mL，用0.45μm滤膜过滤。2)将特立帕肽粗品溶液以聚合物填料为固定相的色谱柱进行梯度洗脱，以0.1-0.5％TFA水溶液为流动相A，以70-90％乙腈水溶液为流动相B。3)将2)得到的合格馏分以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相的色谱柱进行梯度洗脱，以20-100mmol/L硫酸盐缓冲溶液为流动相A，调节pH为2-5；以70-90％乙腈水溶液为流动相B。4)将3)得到的合格馏分用于转盐，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定的色谱柱，先以20-200mmol/L醋酸铵和乙腈，按一定的比例进行离子交换；再以0.01-0.1％醋酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱。5)将转盐后合格馏分，浓缩后上冻干。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述聚合物填料为UniPS40-300。3.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述步骤2)中TFA水溶液浓度为0.1-0.2％，乙腈水浓度为75-85％。4.根据权利要求1或3任一项所述方法，其特征在于：所述步骤2)中TFA水溶液浓度为0.1％，乙腈水浓度为80％，梯度为乙腈％：32-38％。5.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述十八烷基硅烷键合硅胶填料为DaisoC18。6.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述步骤3)中硫酸盐缓冲溶液浓度为20-50mmol/L，乙腈水浓度为70-80％。7.根据权利要求1或6任一项所述方法，其特征在于：所述步骤3)中硫酸盐浓度为50mmol/L，乙腈水浓度为80％。梯度为乙腈％：32-42％。8.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述步骤3)中硫酸盐为硫酸钠。9.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述步骤3)中硫酸盐缓冲溶液pH为2-3。10.根据权利要求1或9任一项所述方法，其特征在于：所述步骤3)中硫酸盐缓冲溶液pH为2.3。11.根据权利要求1、9或10任一项所述方法，其特征在于：所述步骤3)中硫酸盐缓冲溶液pH调节剂为磷酸。12.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述步骤4)中醋酸铵浓度为20-50mmol/L。13.根据权利要求1或12任一项所述方法，其特征在于：所述步骤4)中醋酸铵浓度为50mmol/L。14.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述步骤4)中离子交换的比例为：醋酸铵：乙腈＝95:5。15.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述步骤4)中醋酸水浓度为0.05％，梯度为乙腈％：20-30％。2CN111057142A说明书1/10页一种特立帕肽的纯化方法技术领域[0001]本发明涉及一种肽的纯化方法，尤其涉及特立帕肽的纯化方法。技术背景[0002]特立帕肽，英文名为Teriparatide，是一个34肽，为人甲状腺旁腺激素PTH的1-34氨基酸片段，氨基酸序列为H-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-L