一种非达霉素产物提纯方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109929000A(43)申请公布日2019.06.25(21)申请号201711357880.8(22)申请日2017.12.17(71)申请人天津领世生物科技开发有限公司地址300382天津市西青区精武镇景福花园礼贤里14-4-302(72)发明人闻建华傅红(51)Int.Cl.C07H1/06(2006.01)C07H17/08(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称一种非达霉素产物提纯方法(57)摘要本发明公开了从非达霉素发酵菌丝体中分离纯化非达霉素的方法。该方法是首先将非达霉素发酵液过滤、浸提，浸提液用水稀释后通过大孔树脂脱色、吸附、解析，所得解析液经浓缩、萃取、干燥后得非达霉素粗品；然后将非达霉素粗品用极性有机溶剂溶解，注入到含有硝酸银的大孔吸附树脂柱进行层析分离，得到高纯度的非达霉素精粉。本发明方法有效排除了发酵次级代谢产物的干扰，提高了非达霉素的品质及产品收率。整个工艺简单、树脂填料成本低廉，易操作；所提纯的非达霉素精粉可供药品使用；所提纯精制的非达霉素纯度大于97.5%，全程总收率大于48%。所用溶剂均为常规溶剂，毒性小，适宜于工业化生产。CN109929000ACN109929000A权利要求书1/1页1.一种非达霉素产物提纯方法，其特征在于该方法包括下述步骤：a）常温下将非达霉素发酵液过滤得到菌丝体，然后用极性溶剂浸泡菌丝体并进行固液分离，得非达霉素浸提液；b）将上述非达霉素浸提液用水稀释后导入大孔脱色树脂柱中进行脱色处理，得非达霉素脱色液；c）将非达霉素脱色液导入大孔吸附树脂柱中进行吸附，吸附饱和后的树脂用解吸剂梯度解吸，解吸液浓缩、萃取、干燥后得到非达霉素粗品；d）将非达霉素粗品用极性溶剂溶解，然后将溶解液注入到含有硝酸银的大孔吸附树脂柱进行层析分离，用含硝酸银的洗脱剂进行梯度洗脱，收集洗脱液，合并HPLC测定非达霉素含量大于97%的洗脱液，浓缩、干燥后得到非达霉素精粉。2.根据权利要求1所述的非达霉素产物提纯方法，其特征在于：步骤a所述的极性溶剂为体积百分含量为80～95%的甲醇或乙醇溶液，其加入量为每千克菌丝中加入2～4升。3.根据权利要求1所述的非达霉素产物提纯方法，其特征在于步骤b中的大孔脱色树脂为LX98、或D301树脂中的一种。4.根据权利要求1所述的非达霉素产物提纯方法，其特征在于步骤c所述的大孔吸附树脂为HZ-816、HZ818或D312树脂中的一种。5.根据权利要求1所述的非达霉素产物提纯方法，其特征在于步骤d中所述的大孔吸附树脂为HZ-816、HZ818或HP200中的一种HZ-816、HZ818或D312树脂中的一种。6.根据权利要求1所述的非达霉素产物提纯方法，其特征在于：所述解吸剂或洗脱剂均为甲醇、乙醇或丙酮溶液；所述萃取剂为乙酸乙酯或乙酸丁酯中的一种。2CN109929000A说明书1/3页一种非达霉素产物提纯方法技术领域[0001]本发明涉及抗生素的分离纯化方法，具体地说是从非达霉素发酵菌丝体中提纯非达霉素的一种方法。背景技术[0002]非达霉素（Fidaxomicin）是通过指孢囊菌发酵产生的一种18元环结构的新型大环内酯类抗生素，分子式C52H74Cl2O18。非达霉素属于窄谱型抗菌药物，主要抗革兰阳性需氧及厌氧菌、艰难梭菌，对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌、产气夹膜梭菌和肠球菌有良好的抗菌作用，而对革兰阴性菌抗菌活性极弱。非达霉素对艰难梭菌的MIC50和MIC90均明显低于万古霉素或甲硝唑，治疗减少艰难梭菌感染的复发率和综合治愈率显著优于万古霉素和甲硝唑，且产生抗性的倾向低，具有延长的抗生素后效应、治疗方案简单、交叉耐药性低和不良反应少等优点。[0003]目前，提纯非达霉素的方法，通常是采用非达霉素发酵菌发酵产生非达霉素，然后经过分离、纯化，由此得到高纯度的非达霉素。如CN200880009132公开了一种非达霉素的制备方法，该方法将大孔树脂加入到非达霉素发酵液中，在发酵完成后，首先通过筛析从培养基中分离固体物质（包括吸收剂树脂），用有机溶剂进行洗脱，减压浓缩得非达霉素粗品，粗品再经过反相二氧化硅柱层析（MeOH/H2O/AcOH）、浓缩（浓缩至原始体积的三分之一）、过滤、干燥、结晶过程，可得到纯度为78-94.7%的非达霉素。该方法存在以下缺点：（1）发酵液过滤后树脂和菌丝体共存，筛分困难，树脂难于重复利用，环保处理困难；（2）洗脱液未经脱色除杂，直接得到粗提物，含杂质较多，对下游纯化介质造成的损伤大；（3）反相二氧化硅柱层析采用MeOH/H2O/AcOH的三相洗脱系统，其中醋酸不仅会破坏柱体本身的键合相，降低反相柱的利用率，而且醋酸沸点较高为118℃，在回收溶剂时，水和