一种辅酶Q10的提取制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109957583A(43)申请公布日2019.07.02(21)申请号201711334342.7(22)申请日2017.12.14(71)申请人青岛华迈士药业有限公司地址266100山东省青岛市崂山区株州路108-1号(72)发明人刘乃山马雪(51)Int.Cl.C12P7/66(2006.01)C07C46/10(2006.01)C12R1/38(2006.01)权利要求书1页说明书2页(54)发明名称一种辅酶Q10的提取制备方法(57)摘要一种辅酶Q10的提取制备方法，本发明公开了辅酶Q10注射液及其制备方法，其制备方法是利用光合细菌发酵后离心得到浓缩菌泥，再进行破壁得到破壁菌体，对破壁菌体皂化后用石油醚进行萃取得辅酶Q10粗制品，将粗制品进行吸附、洗脱、浓缩等制成符合注射剂要求的静脉注射制剂，纯度达93.4％。本发明方法步骤简单，操作简便，原理可靠，设计科学，成本低廉，溶剂平均回收率高，条件可控，提取效率高，产品纯度好。CN109957583ACN109957583A权利要求书1/1页1.一种辅酶Q10的提取制备方法，其特征在于：采用细菌发酵、化学皂化、洗脱方法制备辅酶Q10，其特征在于包括如下步骤：(1)细菌发酵：将培养用水加入透光容器后，加入培养用水重量0.1％的消毒剂，搅拌均匀、静置后过滤得灭菌清液；向灭菌清液中加入培养用水重量1％的细菌培养剂，充分溶解、搅匀后得培养液，向培养液中加入沼泽红假单胞菌种液并搅拌均匀；把已接种好的沼泽红假单胞菌分装至发酵容器中，置于室外有光照处，每日搅拌十次以上，15-40℃条件下培养2-5天至生物量达108时采收；(2)离心浓缩：将采收的沼泽红假单胞菌菌液用离心机离心，使离心率达95％以上，得到浓缩菌泥；(3)破壁处理：将浓缩菌泥放入细胞破碎机进行破壁处理，控温10℃以下，压力10000Pa，反复两次，使菌体破壁率达90％以上，以得到破壁菌体；(4)皂化处理：向每150kg的破壁菌体中加入焦性没食子酸700g，氢氧化钾5kg，甲醇35kg和纯净水50L，混合均匀后放入反应釜中回流30min，然后迅速冷却至室温；(5)萃取回收：向反应釜中加入石油醚萃取2次，每次加入的石油醚的体积数与步骤(4)中破壁菌体的质量数的比值为1:1，然后快速搅拌5分钟，在温度为20℃条件下静置1h后分离萃取液，将两次萃取液合并回收；将反应釜升温至65℃，经挥发回收残留石油醚，反应釜中所剩物即为辅酶Q10粗制品；(6)纯化处理：具体步骤包括：Ⅰ.将辅酶Q10粗制品用无水乙醇溶解后制成体积百分比浓度为20％的辅酶Q10乙醇溶液；Ⅱ.将辅酶Q10乙醇溶液加入反应釜中，每100L辅酶Q10乙醇溶液中加入树脂30kg，持续搅拌30min，使辅酶Q10充分被树脂吸附，然后分离取出树脂；Ⅲ.将吸附有辅酶Q10的树脂用丙酮解析洗脱2次；Ⅳ.将两次丙酮洗脱液进行合并，减压到常压101325Pa，回收丙酮后得到辅酶Q10浓缩液；Ⅴ.将浓缩液在0℃条件静置过夜24小时有结晶体析出，回收结晶体经干燥后得纯品，纯度达93.4％。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中细菌发酵15-40℃条件下培养2-5天至生物量达108时采收。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中离心率达95％以上。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中控温10℃以下，压力10000Pa，菌体破壁率达90％以上。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4）中回流时间30min。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（5）中在温度为20℃条件下静置1h后分离萃取液，反应釜升温至65℃。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（6）中将浓缩液在0℃条件静置过夜24小时。2CN109957583A说明书1/2页一种辅酶Q10的提取制备方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及采用细菌发酵、化学皂化、洗脱方法制备辅酶Q10。背景技术[0002]辅酶Q10具有促进氧化磷酸化反应和保护生物膜结构完整性的功能，是广泛存在于生物体内的脂溶性醌类化合物。辅酶Q10在体内呼吸链中质子移位及电子传递中起重要作用，它是细胞呼吸和细胞代谢的激活剂，也是重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂。因此，辅酶Q10具有良好的医学应用前景。发明内容[0003]本发明提供了一种新型制备辅酶Q10的方法。采用细菌发酵、化学皂化、洗脱方法制备辅酶Q10。利用光合细菌发酵后离心得到浓缩菌泥，再进行破壁得到破壁菌体，对破壁菌体皂化后用石油醚进行萃取得辅酶Q10粗制品，将粗制品进行吸附、洗脱、浓缩等制成符合注射剂要求的静脉注射制剂，纯度达93.4％。为