一种磁珠悬浮溶液及其使用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110283814A(43)申请公布日2019.09.27(21)申请号201910595352.9(22)申请日2019.07.03(71)申请人上海睿璟生物科技有限公司地址201100上海市闵行区召楼路3632号2幢5层(72)发明人包文静金安娜高伙妮龚伟(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图3页(54)发明名称一种磁珠悬浮溶液及其使用方法(57)摘要本发明公开了一种磁珠悬浮溶液及其使用方法，要解决的是现有国产磁珠核酸纯化试剂盒的质量良莠不齐的问题。本产品包括以下原料：终浓度为0.1-2mol/L的生物缓冲剂、终浓度为10-500ng/μL的硅羧基磁珠、终浓度为1-20mol/L的氯化钠、体积分数为0.1-5％的分散剂和体积分数为10-50％的聚乙二醇，磁珠悬浮溶液的pH值为6-9。本产品价格低廉，对比市场占有率最高的XP磁珠，相同纯化比例下，本产品的纯化回收率与其接近；相同纯化比例下，本产品的回收片段大小与其一致；本产品仅用到磁力架，因此相较于其他传统方法，通量得到了显著提高；本产品操作简单，对仪器要求不高，操作时间短。CN110283814ACN110283814A权利要求书1/1页1.一种磁珠悬浮溶液，其特征在于，包括以下原料：终浓度为0.1-2mol/L的生物缓冲剂、终浓度为10-500ng/μL的硅羧基磁珠、终浓度为1-20mol/L的氯化钠、体积分数为0.1-5％的分散剂和体积分数为10-50％的聚乙二醇，磁珠悬浮溶液的pH值为6-9。2.根据权利要求1所述的磁珠悬浮溶液，其特征在于，所述分散剂采用吐温20，生物缓冲剂采用三羟甲基氨基甲烷。3.根据权利要求1或2所述的磁珠悬浮溶液，其特征在于，所述聚乙二醇的相对分子量为1000-10000。4.一种如权利要求1-3任一所述的磁珠悬浮溶液进行DNA纯化的使用方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤一，将磁珠悬浮溶液从2-8℃冰箱中取出，室温下孵育25-35分钟；步骤二，将待纯化的核酸样本加入磁珠悬浮溶液中，然后混合均匀，在室温下孵育2-10分钟，静置直至液体澄清，分离得到上清液和沉淀；步骤三，将沉淀转移至新试管中并且用乙醇清洗2-3次，弃残液，然后洗脱DNA，室温静置2-6分钟，然后放置在磁力架上，得到的上清液即纯化后的DNA产物。5.根据权利要求4所述的磁珠悬浮溶液进行DNA纯化的使用方法，其特征在于，所述磁珠悬浮溶液在使用前采用涡旋混匀器混合均匀。6.根据权利要求4或5所述的磁珠悬浮溶液进行DNA纯化的使用方法，其特征在于，所述步骤三中乙醇的体积分数为80％。7.一种如权利要求1-3任一所述的磁珠悬浮溶液进行DNA片段筛选的使用方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤一，将磁珠悬浮溶液从2-8℃冰箱中取出，室温下孵育25-35分钟；步骤二，将待纯化的核酸样本加入磁珠悬浮溶液中，然后混合均匀，在室温下孵育2-10分钟，静置直至液体澄清，分离得到上清液和沉淀；步骤三，将沉淀转移至新试管中并且加入磁珠悬浮液，混匀并且在室温下孵育2-10分钟，静置直至澄清，将上清液转移至新试管中并且加入磁珠悬浮溶液，混匀并且在室温下孵育2-10分钟，再用乙醇清洗2-3次，弃残液，然后洗脱DNA，室温静置2-6分钟，然后放置在磁力架上，得到的上清液即纯化后的DNA产物。8.根据权利要求7所述的磁珠悬浮溶液进行DNA片段筛选的使用方法，其特征在于，所述步骤三中采用低盐溶液或无核酸酶水洗脱DNA。2CN110283814A说明书1/4页一种磁珠悬浮溶液及其使用方法技术领域[0001]本发明涉及核酸纯化和片段筛选领域，具体是一种磁珠悬浮溶液。背景技术[0002]高通量测序技术(NGS)涵盖文库构建、上机测序、数据分析、医学解读四个模块。其中文库构建是高通量测序技术的基石，也是高通量测序技术中的实验(WETLAB)端。[0003]文库构建包括以下步骤：核酸片段化(化学酶切或物理打断)、末端修复反应、片段筛选与纯化、末端加A反应、片段筛选与纯化、连接接头反应、片段筛选与纯化、PCR扩增富集反应、PCR产物纯化、文库质检、(后面过程在涉及到探针捕获才需进行)杂交捕获、再次PCR扩增富集反应、PCR产物纯化、文库质检等过程。由上可知，文库构建过程中涉及到大量的核酸纯化及片段筛选的工作。[0004]针对核酸纯化及片段筛选的传统方法有切胶回收法及离心过柱法等。切胶回收法的简要步骤如下：制备琼脂糖凝胶、点样电泳、切胶回收；该过程操作繁琐、对电泳缓冲液要求高，UV时长易对DNA造成损伤。离心柱法的简要步骤如下：滤膜吸附、洗液洗涤、干燥滤膜、洗脱核酸；该过程操作繁琐，回收率普遍偏低，无法实现高