一种用于核酸纯化和筛选的磁珠悬浮液及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109735532A(43)申请公布日2019.05.10(21)申请号201811643990.5(22)申请日2018.12.30(71)申请人北京优迅医学检验实验室有限公司地址100195北京市海淀区四季青杏石口路65号益园创新产业基地C7(72)发明人孙广欣王冬王建伟伍启熹刘倩刘珂弟唐宇(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王文君陈征(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)C12Q1/6806(2018.01)权利要求书1页说明书7页附图2页(54)发明名称一种用于核酸纯化和筛选的磁珠悬浮液及其应用(57)摘要本发明属于磁珠应用技术领域，公开了一种用于核酸纯化和筛选的磁珠悬浮液及其应用，本发明的磁珠悬浮液含有羧基化修饰的纳米磁珠，PEG聚乙二醇，氯化钠和/或氯化镁，乙二胺四乙酸，Tris-HCl，N-月桂酰肌氨酸钠，吐温20，溶剂为水，其中纳米磁珠的浓度为0.1-5mg/mL。本发明的磁珠悬浮液能够纯化核酸，回收率高达96.42％，并且具有良好的DNA片段筛选功能。本发明的磁珠悬浮液性能稳定，适合高通量样本操作，成本低，灵活性高，适合各工作站使用。CN109735532ACN109735532A权利要求书1/1页1.一种磁珠悬浮液，其特征在于，含有羧基化修饰的纳米磁珠，PEG聚乙二醇，氯化钠和/或氯化镁，乙二胺四乙酸，Tris-HCl，N-月桂酰肌氨酸钠，吐温20，溶剂为水，其中纳米磁珠在磁珠悬浮液中的浓度为0.1-5mg/mL。2.根据权利要求1所述的磁珠悬浮液，其特征在于，所述羧基化修饰的纳米磁珠磁核成份为四氧化三铁，磁含量＞70wt％；磁珠颗粒直径为0.5μm-1.0μm，或符合前述条件的多种尺寸磁珠颗粒混合使用。3.根据权利要求1所述的磁珠悬浮液，其特征在于，所述聚乙二醇PEG为PEG6000-PEG10000范围内的一种或多种混合使用；PEG在磁珠悬浮液中的质量百分比为8％-20％，所述质量体积比为：g/100mL。4.根据权利要求1所述的磁珠悬浮液，其特征在于，所述氯化钠在磁珠悬浮液中的摩尔浓度为0.5mol/L-5mol/L；所述氯化镁在磁珠悬浮液中的摩尔浓度0.3mol/L-1mol/L；所述乙二胺四乙酸的摩尔浓度为0.1mmol/L-10mmol/L；所述Tris-HCl的摩尔浓度为0.1mmol/L-10mmol/L，pH值为7.5-8.5。5.根据权利要求1-4任一所述的磁珠悬浮液，其特征在于，所述N-月桂酰肌氨酸钠的质量体积比为0-0.1％，所述质量体积比为：g/100mL；所述吐温20的是用纯水稀释至体积百分比为0-5％。6.含有权利要求1-5任一所述磁珠悬浮液的用于核酸纯化或筛选的试剂盒。7.权利要求1-5任一所述的磁珠悬浮液在高通量测序文库构建中的应用。8.权利要求1-5任一所述的磁珠悬浮液在核酸纯化或筛选核酸片段中的应用。9.一种纯化核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将权利要求1-5任一所述的磁珠悬浮液加入待纯化核酸样本中混匀，二者体积比为(0.4：1)-(2.5：1)；静置于磁力架至磁珠全部吸附在磁力架上；(2)吸弃步骤(1)的上清液，加入80％乙醇静置1.5-3min后再次吸弃上清液，加入80％乙醇静置1.5-3min，吸弃上清液，确保无明显液滴；(3)吸弃步骤(2)的上清液，加入80％乙醇静置1.5-3min后再次吸弃上清液，加入80％乙醇静置1.5-3min，吸弃上清液，确保无明显液滴；(4)晾干结合了核酸的磁珠，纯水洗脱磁珠，洗脱液瞬时离心，静置于磁力架，至磁珠全部被磁力架吸附，吸取上层澄清液体，即得纯化后的核酸溶液。10.一种筛选核酸片段能力的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取50bp的ladder若干，若样本体积小于50μL，则补充纯水至体积50μL；向混合物中加入权利要求1-5任一所述的磁珠悬浮液，核酸与磁珠的体积比例为(0.4：1)-(2.5：1)，混匀；静置于磁力架至磁珠全部吸附在磁力架上；(2)吸弃步骤(1)的上清液，加入80％乙醇静置1.5-3min后再次吸弃上清液，加入80％乙醇静置1.5-3min，吸弃上清液，确保无明显液滴；(3)吸弃步骤(2)的上清液，加入80％乙醇静置1.5-3min后再次吸弃上清液，加入80％乙醇静置1.5-3min，吸弃上清液，确保无明显液滴；(4)晾干结合了核酸的磁珠，纯水洗脱磁珠，洗脱液瞬时离心，静置于磁力架，至磁珠全部被磁力架吸附，吸取上层澄清液体，加入loadingbuffer进行凝胶电泳检测。2CN109735532A说明书1/7页一种用于核酸纯化和筛选的磁珠悬浮液及其应用技术领域[0