一种亮丙瑞林的固液合成方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110386964A(43)申请公布日2019.10.29(21)申请号201810363465.1(22)申请日2018.04.21(71)申请人深圳市健元医药科技有限公司地址518118广东省深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼806-810(72)发明人张建松李新宇张利香(51)Int.Cl.C07K7/23(2006.01)C07K1/06(2006.01)C07K1/04(2006.01)C07K1/02(2006.01)权利要求书1页说明书11页附图6页(54)发明名称一种亮丙瑞林的固液合成方法(57)摘要本发明公开了一种亮丙瑞林的固液合成方法，包括如下步骤：采用HMBAlinker偶联AMResin得到HMBALinkerAMResin，再将液相合成的二肽应用到固相合成中，得到全保护的肽树脂；将肽树脂用乙胺溶液胺解得到末端乙胺化的全保护肽，经三氟乙酸脱保护得到粗肽；将粗肽经过高效液相色谱制备得到高质量的精肽。本发明提供的亮丙瑞林的固液合成方法有效解决了现有技术偶联不稳定的问题，避免了二酮哌嗪副反应，保证了固相合成的收率及粗肽的纯度，简化了反应操作，提高了收率，并且避免了现有工艺报道液相缩合乙胺盐酸盐的消旋副反应；与现有技术相比反应操作简单、原料投入少、成本低、收率高，容易达到产业化的要求，具有广泛的市场前景。CN110386964ACN110386964A权利要求书1/1页1.一种亮丙瑞林的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)Fmoc-Leu-OH与HOPFP在缩合剂作用下得到Fmoc-Leu-OPFP；Fmoc-Leu-OPFP与H-Arg(Pbf)-OH在碱作用下反应生成Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-OH；(2)以AMResin为起始树脂，与HMBALinker偶联后得到HMBAAMResin，再与N端Fmoc保护的氨基酸Fmoc-Pro-OH缩合得到Fmoc-Pro-HMBAAMResin；(3)脱除Fmoc-Pro-HMBAAMResin中的Fmoc保护，得到H-Pro-HMBAAMResin，再与步骤1中得到的Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-OH缩合得到Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-HMBAAMResin；(4)通过固相合成法，按照亮丙瑞林主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，得到全保护肽树脂；(5)用乙胺溶液胺解全保护肽树脂，得到碳端乙胺化的全保护肽；(6)全保护肽用酸性试剂脱保护后得到粗肽；(7)纯化、转盐、浓缩、冷冻干燥，得到产品亮丙瑞林醋酸盐。2.根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的制备工艺，其特征在于：步骤2中所述HMBALinker为4-羟甲基苯甲酸同系物，可选自下述结构中任何一种：3.根据权利要求1所述的亮丙瑞林的制备方法，其特征在于：步骤1中所述的缩合剂选自HOBt/HOAT、DIC/DCC/EDC.HCl、HATU、HBTU、HCTU、PyBOP、PyAOP中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的制备工艺，其特征在于：步骤1中所述的碱选自DIEA、吡啶、碳酸氢钠、碳酸钠、吗啡林、氢氧化钠中的任何一种。5.根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的制备工艺，其特征在于：步骤2中所述AMResin的替代度1.5mmol/g～3.0mmol/g。6.根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的制备工艺，其特征在于：相对于合成规模，保护氨基酸与树脂的投料量比值为1.5～3.0eq，氨基酸和缩合剂的比为1：1.1。7.根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的制备工艺，其特征在于：步骤5中所述乙胺溶液溶剂可选自甲醇溶液、乙醇溶液、四氢呋喃溶液、水溶液中的任何一种。8.根据权利要求1或7中任一所述的乙胺溶液，其特征在于：乙胺溶液的浓度为20％-75％。9.根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的制备工艺，其特征在于：步骤6中所述酸性试剂可选自三氟乙酸/捕获剂/抗氧化剂的组合溶液、氯化氢的四氢呋喃溶液、氯化氢的乙酸乙酯溶液中的任何一种。2CN110386964A说明书1/11页一种亮丙瑞林的固液合成方法技术领域[0001]本发明涉及一种多肽的合成方法，特别涉及一种亮丙瑞林的固液合成方法。背景技术[0002]亮丙瑞林，英文名Leuprorelin，化学名：5-氧代-脯氨酰-组氨酰-色氨酰-丝氨酰-酪氨酰-D-亮氨酰-亮氨酰-精氨酰-N-乙基-脯氨酰胺，CAS号：53714-56-0，肽序：H-Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5，分子式：C59H84N16O12，分子量：1209.41。[0003]亮丙瑞林是一种促性