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微波固相合成醋酸亮丙瑞林——新型固相多肽合成反应器研制及应用
引言
多肽合成是一种重要的生物化学领域，已被广泛应用于药物研发、蛋白质表达、生物传感器、抗体制备等方面。近年来，随着固相多肽合成技术的发展，不仅大大缩短了合成时间和提高了产率，更极大地扩展了多肽的研究范围。尤其对于小分子肽类，固相多肽合成技术的优势更为明显。
近年来，微波技术作为一种快速、高效、安全的加热手段，被越来越多地应用于多肽合成中。微波加热可以显著提高合成反应的速率和产率。
醋酸亮丙瑞林(Ac-LRP-L-OH)是一种十分重要的肽类，广泛应用于基因工程药物和治疗幽门螺杆菌的抗生素的制备中。然而，目前该肽的合成方法较为繁琐，产率较低，而且多肽片段需要进行保护和去保护操作多次才能完成，会导致合成过程的中间产物浪费，反应时间长。因此，设计一种高效率、简便、可扩展的醋酸亮丙瑞林固相多肽合成，具有十分重要的意义。本研究旨在研制一种新型的固相多肽合成反应器，应用微波技术高效合成醋酸亮丙瑞林，从而提高合成效率。
实验部分
材料和仪器
1.仪器:多肽合成仪，微波反应器，高效液相色谱质谱联用仪，测量微量梯度液相色谱仪.
2.化学品：Fmoc-Lys（Fmoc）-Wang树脂，氯化亮丙氨酸（Lys（OBzl）-Cl）,醋酸亮丙氨酸（Ac-Lys-OH），Fmoc-保护氨基酸.
实验步骤
1.在多肽合成仪中以乙腈/DMF混合液作溶剂，采用Fmoc-化学手性保护肽合成方法，将Fmoc-Lys（Fmoc）-Wang树脂载体装入反应器中，采用手性DIPEA/HOBt，与氯化亮丙氨酸（Lys（OBzl）-Cl）活性保护肽结合，通过自动升温升压，进行活化、耦合反应。保留空气中，反应0.5h后，采用多肽合成仪自动洗脱反应器中未参与反应的亚甲基酯氨基酸和脱保护剂的废液。
2.接下来将反应器中的多肽生成物保护去除，使其生成自由氨基酸和活性亚甲基酯催化剂。采用10％TFA/乙腈混合物溶液洗脱。洗脱后,在45℃，02个小时下面进行配合。保留对空气,多肽上的甲基酯保护基转化为自由羧基。
3.将反应器中的多肽保护去除，生成自由氨基酸和活性亚甲基酯催化剂。采用10％TFA/乙腈混合物洗脱。之后，利用反应器进行微波加热反应,用DMF/THF二元溶液进行氨基酸耦合。反应次数和微波功率随时间变化，进行优化和监测，保留空气进行洗脱。检测合成产物的纯度。
4.用异丙醇脱保护法去除多肽合成中的保护基。在反应器中加入异丙醇/TFA混合物，进行漂洗和微波加热，同时巧妙选择异丙醇脱保护法在保障多肽生成物整体结构的情况下,为后续的提纯合成产物创造了条件。
5.对多肽进行柱层析或逆向高效液相色谱-质谱联用仪进行分离和纯化。主要检测样品的纯度和结构。
结果和讨论
通过将微波技术应用于多肽合成，在固相肽合成方面获得了很大的成功。通过设计新型的微波反应器，在微波加热下，进行多肽的合成。通过多种微处理工艺和氨基酸耦合技术等力求最佳反应条件，加快反应，并获得了相对高的产率和纯度。
经过实验，采用多段微波反应器，微控制技术等，在反应过程中加快了反应速率，减少了浪费中间产物的情况，使得醋酸亮丙瑞林的合成效率大大提高，同时，也可以扩展到其它类似的多肽合成反应中。同时，本研究中采用的异丙醇脱保护法也克服了多肽合成过程中去保护步骤频繁，浪费时间和成本的问题。
结论
本研究表明，对醋酸亮丙瑞林的多肽合成过程中，采用微波技术可以达到实现高效合成、高产率、高纯度的目的。同时，采用异丙醇脱保护法，可以加快去保护步骤，降低多肽合成中的成本和时间消耗。这可以为多肽合成和高效肽片段合成提供新的方向。