一种亮丙瑞林的固液相制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115181163A(43)申请公布日2022.10.14(21)申请号202210712403.3C07K1/14(2006.01)(22)申请日2022.06.22(71)申请人四川吉晟生物医药有限公司地址614000四川省乐山市高新区建业大道3号(72)发明人龙春艳易文铖倪红飞伍万兵(74)专利代理机构成都慕川专利代理事务所(普通合伙)51278专利代理师冯琬茹(51)Int.Cl.C07K7/23(2006.01)C07K1/04(2006.01)C07K1/06(2006.01)C07K1/16(2006.01)C07K1/10(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种亮丙瑞林的固液相制备方法(57)摘要本发明提供了一种亮丙瑞林的固液相制备方法，包括步骤：步骤一、用脱保护试剂将Fmoc‑Pro‑CTC树脂脱保护，去Fmoc保护基团；步骤二、以脱保护后的Pro树脂为起始原料，以Fmoc保护的氨基酸及二氨基酸为单体，逐一偶联氨基酸，得到亮丙瑞林前体肽树脂；步骤三、对亮丙瑞林前体肽树脂进行切割，得到侧链全保护的亮丙瑞林前体肽；步骤四、侧链全保护的亮丙瑞林前体肽在液相中进行乙胺化，乙胺化后，再进行侧链脱保护基团的裂解反应，得到亮丙瑞林粗品；步骤五、亮丙瑞林粗品经过纯化、转盐、冷冻干燥得到亮丙瑞林精品。本发明采用商品化的低取代度Fmoc‑Pro‑CTC树脂为起始原料，以便减小合成过程中的空间位阻，提高合成效率和产品收率，降低精制难度和成本。CN115181163ACN115181163A权利要求书1/1页1.一种亮丙瑞林的固液相制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、用脱保护试剂将Fmoc‑Pro‑CTC树脂脱保护，去Fmoc保护基团；步骤二、以脱保护后的Pro‑CTC树脂为起始原料，以Fmoc保护的氨基酸及二氨基酸为单体，逐一偶联氨基酸，得到侧链全保护亮丙瑞林前体肽树脂；步骤三、对侧链全保护亮丙瑞林前体肽树脂脱树脂载体，得到侧链保护亮丙瑞林前体肽；步骤四、对侧链保护亮丙瑞林前体肽经过乙胺化，得到侧链保护亮丙瑞林；步骤五、对亮丙瑞林粗肽经过高压液相柱分离纯化、转盐、冷冻干燥得到亮丙瑞林精肽。2.根据权利要求1所述的亮丙瑞林的固液相制备方法，其特征在于，在步骤一中，所述脱保护试剂为哌啶/DMF溶液，哌啶占所述脱保护试剂的体积百分比为20％‑30％；所述脱保护的反应温度为15～25℃。3.根据权利要求1所述的亮丙瑞林的固液相制备方法，其特征在于，在步骤二中，所述Fmoc保护的氨基酸分别以Fmoc‑Arg(pbf)‑OH、Fmoc‑D‑Leu‑Leu‑OH、Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH、Fmoc‑Ser(tBu)‑OH、Fmoc‑Trp(boc)‑OH、Fmoc‑His(Trt)‑OH和pGlu的形式应用。4.根据权利要求1所述的亮丙瑞林的固液相制备方法，其特征在于，在步骤二中，偶联试剂为HBTU/HOBt/DIEA,或者HOBt/DIC，偶联试剂的摩尔比为1:5，偶联反应温度为室温；偶联反应时间为1‑4小时，逐一偶联反应结束和脱去Fmoc保护后经过KaiserTest检测。5.根据权利要求1所述的亮丙瑞林的固液相制备方法，其特征在于，在步骤三中，对侧链全保护亮丙瑞林前体肽树脂进行切割反应中，切割试剂为是1～2％的TFA/DCM溶液(v/v)或者20～30％的TEA/DCM(v/v)溶液。6.根据权利要求1所述的亮丙瑞林的固液相制备方法，其特征在于，在步骤四中，所述的对侧链保护亮丙瑞林前体肽进行乙胺化反应，乙胺化方法是采用乙胺盐酸盐原料形式进行反应；所述偶联试剂是DIC/HOBT、DIC/OP、PYBOP/HOBT/DIEA中的一种。7.根据权利要求1所述的亮丙瑞林的固液相制备方法，其特征在于，在步骤四中，对侧链保护亮丙瑞林经过脱侧链保护基团的反应，获得亮丙瑞林粗肽。8.根据权利要求1所述的亮丙瑞林的固液相制备方法，其特征在于，在步骤四中，所述侧链全保护亮丙瑞林粗肽经过脱侧链保护基团的反应，获得亮丙瑞林粗品的实验过程中，裂解剂为三氟醋酸、1,2‑乙二硫醇、三异丙基硅烷和水的混合溶剂；混合溶剂中含有TFA85％～94％、EDT2％～4％和TIS2％～4％，余下为水。2CN115181163A说明书1/6页一种亮丙瑞林的固液相制备方法技术领域[0001]本发明涉及亮丙瑞林制备技术领域，具体涉及一种亮丙瑞林的固液相制备方法。背景技术[0002]亮丙瑞林为促性腺素释放素(GnRH)类似物，是由9个氨基酸构成的肽类。本品能有效地抑制垂体‑性腺系统的功能，对蛋白分解酶的抵抗力和对垂体GnRH受体的亲和力均强于GnRH，促进黄体生成素(LH)释放的活性约为