一种液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110618214A(43)申请公布日2019.12.27(21)申请号201910985093.0(22)申请日2019.10.16(71)申请人台州科技职业学院地址318020浙江省台州市黄岩区嘉木路288号(72)发明人刘萍(74)专利代理机构台州蓝天知识产权代理有限公司33229代理人王卫兵(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/72(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/04(2006.01)G01N30/86(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称一种液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法(57)摘要本发明公开了一种液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法。该方法采用高效液相色谱-串联质谱对液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸进行测定和确证；通过换算系数和已测定的β-羟基-β-甲基丁酸含量，换算得到液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸钙盐的含量。该方法包括液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸测定的样品前处理步骤，空白试验方法，高效液相色谱-串联质谱的测定和确证步骤，以及液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸钙盐的换算方法。本发明提供的液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法，具有色谱保留和线性关系好、样品前处理较简单、回收率和准确度高等优点，可广泛应用于液体饮料样品中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐成分的定量检测和掺假判别。CN110618214ACN110618214A权利要求书1/2页1.一种液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸及其钙盐的测定和确证方法，其特征在于该检测方法包括以下的步骤：(1)对不含和含二氧化碳液体饮料样品的前处理；(2)空白试验：除未添加液体饮料样品外，其他均按照步骤(1)方法处理后得到的样品；(3)高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定和确证β-羟基-β-甲基丁酸；(4)液体饮料中β-羟基-β-甲基丁酸钙盐含量的换算。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，不含二氧化碳液体饮料样品的前处理步骤为：称取1～5g均匀试样至50mL容量瓶中，添加约25mL0.1％甲酸甲醇溶液混匀后，超声提取10min，冷却至室温后用0.1％甲酸甲醇溶液定容至刻度混匀。将容量瓶中适量液体转移至塑料离心管中，以≥10000rpm的速度离心5min，将上清液转移至进样瓶中，待测。如上清液中的β-羟基-β-甲基丁酸浓度过大，并超校准曲线范围，应按照逐级稀释的原则，将上清液用0.1％甲酸甲醇溶液稀释后再进行测定。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，含二氧化碳液体饮料样品的前处理步骤为：转移适量液体试样至烧杯中，置于超声波清洗器中超声，直至烧杯中液体试样无气泡冒出，取出烧杯冷却至室温。称取1～5g均匀试样至50mL容量瓶中，添加约25mL0.1％甲酸甲醇溶液混匀后，超声提取10min，冷却至室温后用0.1％甲酸甲醇溶液定容至刻度混匀。将容量瓶中适量液体转移至塑料离心管中，以≥10000rpm的速度离心5min，将上清液转移至进样瓶中，待测。如上清液中的β-羟基-β-甲基丁酸浓度过大，并超校准曲线范围，应按照逐级稀释的原则，将上清液用0.1％甲酸甲醇溶液稀释后再进行测定。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定β-羟基-β-甲基丁酸的条件如下：色谱柱：极性端基封尾的C18固定相色谱柱(SynergyHydro-RP色谱柱，250×4.6mm，4μm)或相当者；梯度洗脱：流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇，梯度洗脱条件设定为：0～15.0min，10～50％B；15.0～15.1min，50～10％B；15.1～20min，10％B；柱温箱温度：30℃；进样量：10μL；流速：0.8mL/min；电喷雾离子源工作模式：负离子；数据采集模式：多反应监测(MRM)模式；MRM的特征母离子/子离子对：117.0/59.0和117.0/41.0；帘气：40.0L/min；碰撞气：中等(Medium)；电喷雾离子源电压：-4500V；温度(TEM)：550℃；离子源气体1：70.0psi；离子源气体2：70.0psi；入口电压：-10.0V；碰撞室出口电压：-13.0V；2CN110618214A权利要求书2/2页测量方式：校准曲线外标法定量。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)确证β-羟基-β-甲基丁酸的方法如下：按照高效液相色谱-质谱条件对标准工作溶液和样液进