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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110669814A(43)申请公布日2020.01.10(21)申请号201911058174.2A23J3/34(2006.01)(22)申请日2019.11.01A23L33/18(2016.01)A61P9/12(2006.01)(71)申请人中国农业大学地址100191北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人江正强闫巧娟张鹏刘海杰常畅(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人吴爱琴(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K7/06(2006.01)A61K38/08(2019.01)A61K38/02(2006.01)A23J3/18(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图4页(54)发明名称一种具有降血压活性的小麦蛋白肽及其制备方法(57)摘要本发明提供一种具有降血压活性的小麦蛋白肽及其制备方法。包括:使用电解水预处理小麦谷朊粉,配制小麦谷朊粉混悬液,碱性蛋白酶和铜绿假单胞菌来源蛋白酶分步酶解,过滤、浓缩和喷雾干燥。利用本发明方法可制得低分子量小麦肽,蛋白回收率65%以上,分子量小于1000Da的部分占95%以上;本发明方法降血压肽转化率高,经体外活性测定,体外ACE半抑制浓度为0.21mg/mL;还具有良好的胃肠消化稳定性;从此方法制备的小麦肽中分离鉴定到两条新型高ACE抑制活性肽段(SAGGYIW、APATPSFW),体外ACE半抑制浓度分别为2.65μM和41.1μM。CN110669814ACN110669814A权利要求书1/2页1.一种制备具有降血压活性的小麦蛋白肽的方法,包括如下步骤:1)采用电解水预处理小麦谷朊粉;2)调节体系的pH值至8.0-9.5,搅拌,得到小麦谷朊粉混悬液;3)依次采用碱性蛋白酶和铜绿假单胞菌来源蛋白酶分步酶解;4)将步骤3)所得酶解液过滤、浓缩和喷雾干燥得到小麦蛋白肽粉。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤1)中,所述电解水的pH值为:3.5-12.5;所述小麦谷朊粉与电解水的比值为:50-200g:1L;所述电解水预处理的时间为:4-8h。3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:步骤3)的操作为:向所述小麦谷朊粉混悬液中加入碱性蛋白酶,水解,加入铜绿假单胞菌来源蛋白酶,继续水解,两步水解后沸水浴灭活,冷却至室温,得到酶解液;其中,所述碱性蛋白酶的加入量为500-1500U每克小麦谷朊粉;所述加入碱性蛋白酶后水解的时间为4-8h;所述铜绿假单胞菌来源蛋白酶的加入量为:500-1000U每克小麦谷朊粉;所述继续水解的时间为4-8h;所述水解和继续水解的温度均为40℃-60℃。4.通过权利要求1-3中任一项所述的方法制备得到的小麦蛋白肽粉,所述小麦蛋白肽粉中分子量小于1000Da的部分大于95%;所述小麦蛋白肽粉的ACE体外半抑制浓度为0.21mg/mL;所述小麦蛋白肽粉具有良好的抗胃肠消化能力。5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其特征在于:所述方法还进一步包括从所得小麦蛋白肽粉中分离得到高活性ACE抑制肽组分的操作;所述操作为:将所述小麦蛋白肽用盐酸溶液溶解,离心处理,取上清液,进行凝胶层析,分离得到7个组分,依次记为F1组分、F2组分、F3组分、F4组分、F5组分、F6组分和F7组分;其中,所述盐酸溶液的浓度为10mM;所述离心的条件为在10000r/min条件下离心10min;采用凝胶层析,色谱条件:AKTApurifierUPC-900快速蛋白液相色谱仪;色谱柱尺寸为1000×10mm,柱料为葡聚糖凝胶G-15;流动相:10mM的盐酸溶液;流速:0.8mL/min;检测:UV280nm;F6组分为洗脱时间在127.5-170min的流出液;F7组分为洗脱时间在170-212.5min的流出液。6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:所述方法还进一步包括从F7组分中分离鉴定得到高活性肽段SAGGYIW和APATPSFW的操作;所述操作为:对F7组分进行nanoLC-MS/MS分析,从中鉴定得到高活性肽段SAGGYIW和APATPSFW。7.权利要求5所述方法分离得到的高活性ACE抑制肽组分F6组分和F7组分;其中,F7组分的ACE半抑制浓度为0.035mg/mL。8.高活性ACE抑制肽段SAGGYIW,其体外ACE半抑制浓度为2.65μM,或,高活性ACE抑制肽2CN110669814A权利要求书2/2页段APATPSFW,其体外ACE半抑制浓度为41.1μM。9.权利要求1-3任一项所述方法制备的小麦蛋白肽、权利要求4所述的小麦蛋白肽、权利要求7所述的F6组分及F7组分或权利要求8所述的肽段SAGGYIW或肽段APAT