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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113555060A(43)申请公布日2021.10.26(21)申请号202110842191.6C12P21/06(2006.01)(22)申请日2021.07.26(71)申请人江南大学地址214000江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号(72)发明人杜晓静王洪新荆慧娟黄鑫王力(74)专利代理机构哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司23211代理人林娟(51)Int.Cl.G16B5/00(2019.01)G16B50/30(2019.01)C07K1/14(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书2页说明书8页(54)发明名称具有降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽的制备方法(57)摘要本发明涉及蛋白领域,尤其涉及一种具有降血糖、降血压活性的山羊乳酪蛋白肽的制备。本发明的制备方法包括:先将山羊奶处理得到山羊乳酪蛋白。利用计算机虚拟酶切山羊奶酪蛋白,并预测不同蛋白酶切割山羊乳酪蛋白得到的多肽活性,筛选出最佳抑制DPP‑IV酶和ACE酶的蛋白酶种类,之后利用不同蛋白酶对山羊乳酪蛋白进行水解,并验证水解产物的活性,最后对水解产物进行纯化即为山羊乳酪蛋白肽。本发明方法利用生物信息学作为山羊乳酪蛋白活性预测的工具,可节省大量时间、科研成本、准确度高且具有靶向指导作用。利用本发明可制备获得具有DPP‑IV抑制活性和ACE抑制活性,蛋白回收率高、分子量较低且具有较好的胃肠消化稳定性的山羊乳酪蛋白肽。CN113555060ACN113555060A权利要求书1/2页1.一种具有降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)基于生物信息学预测不同蛋白酶处理山羊奶酪蛋白得到山羊奶酪蛋白肽的降血糖、降血压活性,并利用生物信息学计算机虚拟筛选出较高降血糖、降血压活性的多种酶;(2)将计算机模拟筛选出的多种酶中的任一种或者组合分别应用于酶解山羊奶酪蛋白,得到对应的酶解产物;(3)试验测试并比较不同酶解产物的降血糖、降血压活性,验证计算机虚拟筛选的准确性,并得到更高降血糖、降血压活性的酶的种类,由更高降血糖、降血压活性的酶酶解处理得到的酶解产物即为具有更高降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽。2.根据权利要求1所述的具有降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)具体为:从蛋白质三维结构数据库RCSBPDB(https://www1.rcsb.org/)中下载山羊乳酪蛋白的各种蛋白类型的一级结构;利用BIOPEP数据库(http://www.uwm.edu.pl/biochemia/biopep/start_biopep.php)中的“ENZYME(S)ACTION”功能对不同类型的山羊乳酪蛋白进行的虚拟蛋白酶切割,并根据蛋白酶切割后的具有DPP‑IV酶、ACE酶的抑制活性的肽片段数量a和氨基酸链长度N的比率预测蛋白酶切割后的肽序列的降血糖、降血压活性,筛选出较高降血糖、降血压活性的多种酶。3.根据权利要求2所述的具有降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)筛选出的较高降血糖、降血压活性的多种酶为菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K、木瓜蛋白酶+蛋白酶K组合酶。4.根据权利要求1所述的具有降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中的山羊奶酪蛋白由山羊奶预处理得到。5.根据权利要求4所述的具有降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽的制备方法,其特征在于,山羊奶预处理具体包括:将山羊奶脱脂、凝乳酶沉淀酪蛋白、收集沉淀物步骤,其中收集的沉淀物即为山羊奶酪蛋白。6.根据权利要求1所述的具有降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中酶解山羊乳酪蛋白的具体操作为:将山羊奶酪蛋白加入蒸馏水,配制成质量浓度为2‑10%的反应底物,之后加入所述步骤(1)筛选出的多种酶中的任一种或者组合,使蛋白酶与底物的最终比例E/S为3000‑15000U/g,按照不同酶种类的最佳酶解条件进行反应,酶解过程中保持恒定的pH值,反应结束后灭酶,离心收集沉淀冻干,粉碎即为酶解产物山羊乳酪蛋白肽。7.根据权利要求1所述的具有降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽的制备方法,其特征在于,在所述步骤(3)之后还包括山羊乳酪蛋白肽的纯化步骤:将冷冻干燥后的山羊乳酪蛋白肽用蒸馏水溶解,然后用超滤膜进行分离纯化,取滤液冷冻干燥即为纯化后的山羊乳酪蛋白肽。8.根据权利要求1所述的具有降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)得到的更高降血糖、降血压活性的酶为木瓜蛋白酶+蛋白酶K组合酶,其中,木瓜蛋白酶:蛋白酶K的复合质量比为