一种叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111153987A(43)申请公布日2020.05.15(21)申请号202010054112.0(22)申请日2020.01.17(71)申请人上海领潮生物新材料有限公司地址201600上海市松江区南乐路1276弄115号10幢201室(72)发明人罗朝领茅柳娟曹雪姣尹文偲倪伟青(74)专利代理机构苏州创元专利商标事务所有限公司32103代理人向亚兰(51)Int.Cl.C07K14/795(2006.01)权利要求书1页说明书14页附图7页(54)发明名称一种叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物及其制备方法，制备方法包括如下：1)使氨基己酸与血蓝蛋白在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺存在下、在水中反应，透析分离，获得含有氨基己酸-血蓝蛋白偶联物的上清液；2)将溶解在碳酸盐缓冲液中的叶酸以及分别溶解在有机溶剂中的N-羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺混合反应，获得反应混合液，再加入上清液中，室温搅拌过夜，制得；本发明方法能够快速高效且高质量(活性好)的制得新型免疫原叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物，耗时短，且目的偶联物收率高，纯度高，用其制备的抗体尤其是单克隆抗体对于叶酸检测而言灵敏度高、特异性好。CN111153987ACN111153987A权利要求书1/1页1.一种叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：(1)使氨基己酸与血蓝蛋白在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺存在下、在水中反应，透析，分离，获得含有氨基己酸-血蓝蛋白偶联物的上清液；(2)将溶解在碳酸盐缓冲液中的叶酸以及分别溶解在有机溶剂中的N-羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺混合反应，获得反应混合液，再将所述反应混合液加入步骤(1)所获得的上清液中，室温搅拌过夜，制得所述叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物。2.根据权利要求1所述的叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述氨基己酸、所述血蓝蛋白和所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺的投料质量比为1∶0.4-0.6∶0.2-0.4。3.根据权利要求1所述的叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述反应在室温下进行；和/或，步骤(1)中，所述反应的反应时间为3-5小时。4.根据权利要求1所述的叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述透析采用的透析液为pH值为7.4-7.6的磷酸缓冲盐溶液。5.根据权利要求1所述的叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述有机溶剂为二甲基亚砜。6.根据权利要求1所述的叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述混合反应在室温下进行。7.根据权利要求1所述的叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，控制溶解在碳酸盐缓冲液中的叶酸的浓度以及溶解在有机溶剂中的N-羟基琥珀酰亚胺的浓度和二环己基碳二亚胺的浓度分别为1-30mg/mL。8.根据权利要求1所述的叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，控制所述叶酸与所述氨基己酸-血蓝蛋白偶联物的投料摩尔比为20-100∶1。9.根据权利要求1所述的叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述混合反应的时间为1-3小时。10.一种权利要求1-9中任一项权利要求所述的制备方法制备的叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物。2CN111153987A说明书1/14页一种叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物及其制备方法技术领域[0001]本发明属于生物工程技术领域，尤其涉及可作免疫原的叶酸偶联物，具体涉及一种叶酸-氨基己酸-血蓝蛋白偶联物(FA-ACA-KLH)及其制备方法。背景技术[0002]叶酸(Folate)是1941年由米切尔(H.K.Mitchell)从菠菜中提取纯化的，其是一种水溶性维生素，因绿叶中含量十分丰富而得名，又名喋酰谷氨酸。在自然界中有几种存在形式，其母体化合物是由喋啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸3种成分结合而成，其分子式为C19H19N7O6，化学结构式如下所示：[0003][0004]叶酸作为机体细胞生长和繁殖必不可少的维生素之一，缺乏会对人体正常的生理活动产生影响。许多文献报道，缺乏叶酸与神经管畸形、巨幼细胞贫血、唇腭裂、抑郁症、肿瘤等疾病有直接关系。[0005]神经管畸形：神经管畸形(NTDs)是胚胎在发育过程中神经管闭合不全而引起的一组缺陷，包括无脑儿、脑膨出、脊柱裂等，是最常见的新生儿缺陷疾病之一。世界范围内NTDs