一种林蛙皮小分子肽螯合铁的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111254178A(43)申请公布日2020.06.09(21)申请号202010209164.0(22)申请日2020.03.23(71)申请人吉林大学地址130012吉林省长春市前进大街2699号(72)发明人卢静刘爽关爽(74)专利代理机构长春市恒誉专利代理事务所(普通合伙)22212代理人李荣武(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K1/34(2006.01)C12N11/10(2006.01)A23L33/18(2016.01)A23L33/165(2016.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称一种林蛙皮小分子肽螯合铁的制备方法(57)摘要本发明涉及一种林蛙皮小分子肽螯合铁的制备方法。利用大量的林蛙皮，进行林蛙皮螯合铁的研究，不仅妥善处理了林蛙皮的问题，还能提高林蛙皮的利用率，提高经济效益和生态效益。包括林蛙皮的粉碎、脱色、脱脂、酶解、超滤以及鳌合。小分子肽螯合铁是新一代的补铁产品，利用壳聚糖固定化技术稳定酶活性，采用双光波-水浴复合酶辅助法酶解林蛙皮，酶解时间短，效率高，采用超滤的方法制备得到小分子肽液。用该方法与亚铁离子鳌合后得到的小分子肽鳌合铁,不需要冻干成肽粉即可以螯合，方法简单，获得的小分子肽鳌合铁螯合率较高，在人体内的吸收率高,补铁效果好。本发明制备的林蛙皮小分子肽螯合铁用于食品、保健、生物制药领域。CN111254178ACN111254178A权利要求书1/2页1.一种林蛙皮小分子肽螯合铁的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：林蛙皮的预处理对林蛙皮进行清洗，45-60℃烘干2-3h，将林蛙皮放入超细粉碎机中进行粉碎，过100-200目筛子，得到林蛙皮细粉；步骤二：脱色脱色剂采用过氧化氢，pH值需维持在弱碱环境下，为保证脱色效率较高同时不影响肽的活性，脱色过程采用含1％H2O2的0.18mol/L氢氧化钠调节pH，脱色时间控制在6-18h,为了脱色完全，可借助超声破碎仪，使林蛙皮粉末能够与脱色液充分混合，达到脱色最佳效果；步骤三：脱脂乳化法进行脱脂，乳化剂采用20％吐温-80，控制料液比在1:10-1:50，脱脂时间控制在3-6h；步骤四：酶固化借助光辐射物理技术对内肽酶、丝氨酸氨肽酶和风味蛋白酶进行定点固定化达到提高复合酶的稳定性，三种酶质量比为2:2:1，固定化时间控制在2-6h，固定化温度控制在50-60℃；步骤五：提取将林蛙皮放置于恒温水浴锅中，加入蒸馏水溶解林蛙皮，加入复合酶，m复合蛋白酶：m原料＝1:50-1:100，采用双光波-水浴复合酶辅助法水解林蛙皮，酶解温度控制在40-60℃，料液比(质量体积比g/ml)为1:10-1:30，红光和红外光双色灯照射时间为20-60min，酶解时间控制在1.5-4h，pH为6.5-8；酶解完成后90℃高温灭酶活15min，8000r/min离心20min，取上清液即获得酶解多肽液；步骤六：分离采用超滤，收集滤液，即得到分子量在1000Da以下的林蛙皮小分子肽液；步骤七：螯合将林蛙小分子肽液加入金属螯合剂生产设备中，加入适量的5％抗坏血酸，向进料口添加无水Fecl2，肽铁比(质量体积比g/ml)为5：1-10:1，调节螯合温度为30-50℃，鳌合时间为40-60min，螯合结束后进入离心罐中，由于小分子肽螯合铁质量较Fe2+重被分离出来,将得到的小分子肽螯合铁加入到含有6-8倍体积的异丙醇沉降罐中，于4℃条件下沉降2h，进行5000r/min离心15min，真空冷冻干燥后即得林蛙皮小分子肽螯合铁。2.根据权利要求1所述的一种林蛙皮小分子肽螯合铁的制备方法,其特征在于，所述步骤一中烘干温度55℃，时间2h，粉碎数目为200目。3.根据权利要求1所述的一种林蛙皮小分子肽螯合铁的制备方法,其特征在于，所述步骤二中将过氧化氢作为脱色剂，脱色时间控制在10h，用氢氧化钠调节pH，维持在弱碱环境中。4.根据权利要求1所述的一种林蛙皮小分子肽螯合铁的制备方法,其特征在于，所述步骤三中脱脂料液比为1:30，脱脂时间为5h。5.根据权利要求1所述的一种林蛙皮小分子肽螯合铁的制备方法,其特征在于，所述步骤四中以壳聚糖为载体固定内肽酶、丝氨酸氨肽酶和风味蛋白酶，三种酶质量比为2:2:1，固化时间为3h，温度为60℃。2CN111254178A权利要求书2/2页6.根据权利要求1所述的一种林蛙皮小分子肽螯合铁的制备方法,其特征在于，所述步骤五中采用双光波-水浴复合酶辅助法，双光波为红光和红外光综合光波照射，酶解温度50℃，料液比为1:20g/ml，m复合蛋白酶：m原料＝1:50，酶解时间为2h，pH为7。7.根据权利要求1所述的一种林蛙皮小分子肽螯合铁的制