一种去除重组白介素-2内毒素的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111793124A(43)申请公布日2020.10.20(21)申请号202010592544.7(22)申请日2020.06.24(71)申请人宁波博睿瀚达生物科技有限公司地址315194浙江省宁波市鄞州区首南街道华茂学府一号B座714室(72)发明人朱文瑾李浛民陈平(74)专利代理机构宁波市鄞州盛飞专利代理事务所(特殊普通合伙)33243代理人邢丽艳洪珊珊(51)Int.Cl.C07K14/55(2006.01)C07K1/18(2006.01)权利要求书1页说明书7页(54)发明名称一种去除重组白介素-2内毒素的方法(57)摘要本发明涉及一种去除重组白介素‑2内毒素的方法，属于生物医药技术领域。本发明去除重组白介素‑2内毒素的方法包括如下步骤：在pH为7.0～7.5的重组白介素‑2样品Ⅰ中添加阴离子助溶剂十二烷基硫酸钠(SDS)，混匀形成重组白介素‑2样品Ⅱ；在重组白介素‑2样品Ⅱ中加入氯化钠至其浓度为0.8～1.2mol/L，形成重组白介素‑2样品Ⅲ，将所述重组白介素‑2样品Ⅲ通过弱阴离子高效液相色谱柱进行动态吸附；采用平衡液对弱阴离子高效液相色谱柱进行第一次洗脱，所述平衡液中含有浓度为0.8～1.2mol/L的氯化钠，然后采用洗脱液进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液，本发明去除重组白介素‑2内毒素的方法具有内毒素去除效率高、回收率高的优点。CN111793124ACN111793124A权利要求书1/1页1.一种去除重组白介素-2内毒素的方法，其特征在于，所述去除重组白介素-2内毒素的方法包括如下步骤：S1、在重组白介素-2样品Ⅰ中添加阴离子助溶剂十二烷基硫酸钠(SDS)，混匀后调节pH至7.0～7.5，形成重组白介素-2样品Ⅱ；S2、在重组白介素-2样品Ⅱ中加入氯化钠至其浓度为0.8～1.2mol/L，形成重组白介素-2样品Ⅲ，将所述重组白介素-2样品Ⅲ通过弱阴离子高效液相色谱柱进行动态吸附；S3、采用平衡液对弱阴离子高效液相色谱柱进行第一次洗脱，所述平衡液中含有浓度为0.8～1.2mol/L的氯化钠，然后采用洗脱液进行第二次洗脱，收集第二次洗脱的洗脱液。2.根据权利要求1所述去除重组白介素-2内毒素的方法，其特征在于，所述去除重组白介素-2内毒素的方法还包括采用大肠杆菌生产重组白介素-2发酵液的预备步骤，以形成重组白介素-2样品Ⅰ。3.根据权利要求1所述去除重组白介素-2内毒素的方法，其特征在于，步骤S1所述阴离子助溶剂的加入量为重组白介素-2样品Ⅰ的0.03～0.07wt％。4.根据权利要求1所述去除重组白介素-2内毒素的方法，其特征在于，步骤S2所述阴离子高效液相色谱柱采用DEAE阴离子交换填料。5.根据权利要求4所述去除重组白介素-2内毒素的方法，其特征在于，步骤S2所述DEAE阴离子交换填料的粒度为4～6μm。6.根据权利要求1所述去除重组白介素-2内毒素的方法，其特征在于，步骤S3所述平衡液包括的组分及其含量如下，Tris-HCl缓冲液：8～12mmol/L，PH为7.0～7.5，NaCl：0.8～1.2mol/L。7.根据权利要求1所述去除重组白介素-2内毒素的方法，其特征在于，步骤S3所述洗脱液为Tris-HCL缓冲液，PH为7.0～7.5。8.根据权利要求1所述去除重组白介素-2内毒素的方法，其特征在于，所述去除重组白介素-2内毒素的方法还包括柱再生的步骤，具体为在所述第二次洗脱之后依次用40～60℃纯净水、1.4～1.6mol/LNaCl溶液对色谱柱进行清洗。2CN111793124A说明书1/7页一种去除重组白介素-2内毒素的方法技术领域[0001]本发明属于生物医药技术领域，涉及一种去除重组白介素-2内毒素的方法。背景技术[0002]1976年，Morgrn等首次发现在丝裂原刺激的淋巴细胞培养上清或称条件培养基(Conditionalmedium，CM)中存在一种细胞因子，能选择性地维持T淋巴细胞在体外长期生长，人们将该因子称为T细胞生长因子(Tcellgrowthfactor，TCGF)。1979年瑞士召开的第二届国际淋巴因子会议上将联系白细胞间相互作用的因子统称为白细胞介素(Interleukin，IL)，并将由激活的T细胞产生的、在淋巴细胞间起相互作用的因子，即TCGF称为白细胞介素-2(Interleukin-2，IL-2)。[0003]IL-2主要由活化的CD4+T细胞和CD8+T细胞(特别是CD4+T细胞)产生，为一种糖蛋白，具有广泛生物活性，能使T细胞在试管内长期存活。随着研究的不断深入，尤其是1983年基因工程(重组)IL-2的问世，使得IL-2的研究取得了更大的进展。人们发现IL-2除了作用